加宽双垂直电泳仪的实验方法及原理

作者：六一生物发布时间：2024-05-17 09:06:21 点击：

加宽双垂直电泳仪的实验方法及原理

一、实验目的

1. 掌握加宽双垂直电泳仪的基本操作方法。
2. 了解加宽双垂直电泳仪的工作原理。
3. 学会利用加宽双垂直电泳仪进行蛋白质分离和鉴定。

二、实验原理

加宽双垂直电泳仪是一种常用的生物化学实验仪器，用于将混合蛋白质在琼脂糖凝胶中进行电泳分离。其工作原理基于蛋白质分子的等电聚焦现象，即不同带电性质的蛋白质会在特定的pH值条件下向阳极或阴极迁移，从而实现蛋白质的分离。

三、实验器材与试剂准备

1. 加宽双垂直电泳仪：包括电源线、滤波器、高压变压器、电极槽等部件。
2. 琼脂糖凝胶：用于制作电泳缓冲液的固体载体。
3. 电泳缓冲液：由磷酸盐、硫酸钠、氯化钾等成分组成，用于调节pH值。
4. DNA标准品：用于定量分析。
5. 样品：待分离的蛋白质混合物。

四、实验步骤

1. 准备琼脂糖凝胶：根据所需分离的蛋白质浓度和分子量，选择合适的琼脂糖凝胶浓度和颗粒大小。将琼脂糖凝胶加入适量的电泳缓冲液中，搅拌均匀至无颗粒可见。

2. 样品处理：将待分离的蛋白质样品加入适量的蛋白酶(如胃蛋白酶)消化约30分钟，以破坏蛋白质间的相互作用力。然后采用高速离心法去除细胞碎片等杂质。最后用生理盐水或PBS溶液稀释至适当浓度。

3. 制备电泳缓冲液：根据所需分离的蛋白质浓度，分别配制不同pH值的电泳缓冲液。将各种成分加入适量的去离子水中，搅拌均匀至无颗粒可见。注意控制pH值在6.0-8.0之间。

4. 上样：将稀释后的蛋白质样品加入到预先制作的琼脂糖凝胶中，使其覆盖整个凝胶表面。用移液器将样品均匀分配在凝胶中，确保无气泡和空隙。

5. 电泳：将装有样品的琼脂糖凝胶放入加宽双垂直电泳仪中，连接好电源线和滤波器。先进行低电压平台(20V)预电泳，待样品全部进入凝胶后，逐渐提高电压(200V-400V),观察蛋白质迁移情况。根据样品的迁移速度和迁移距离，确定其分子量分布。

6. 染色：如果需要鉴定蛋白质种类，可在电泳结束后进行染色。常用的染色方法有银染、溴化物染色等。将染色剂加入到电泳缓冲液中，使样品着色。然后使用显微镜观察染色后的蛋白质分子，根据其特有的颜色和形态特征进行鉴定。

五、实验结果分析

根据加宽双垂直电泳仪测定得到的蛋白质迁移距离和迁移速度，可以推算出蛋白质的分子量分布。同时，通过染色鉴定蛋白质种类，可以进一步了解样品中的各种蛋白质含量及其比例关系。这些信息有助于研究者在生物学、医学等领域开展相关实验和研究。

本文由北京六一生物编辑整理。

北京六一生物科技有限公司创建于1970年，50多年的历史，公司先后3次承担电泳装置产品国家、行业标准的起草、修订工作，2009年负责《基础电泳装置》国家标准已发布实施。专业生产生物化学与分子生物学检验分析仪器的科技型国有企业。

主要生产包含电泳仪、紫外分析仪、凝胶成像分析系统、酶标仪、化学发光成像系统、基因扩增仪等检验分析设备。

如果您对我们的产品有任何问题，欢迎您的来电：400 960 6117

我们的目标是：做生物化学分析仪器行业海尔

标签：