电泳仪跑胶焦点模糊？实验室老司机亲授7步排雷法

作者：六一生物发布时间：2025-06-11 09:45:26 点击：

"跑了8次胶，条带还是糊成一片！"某高校生科院的小林对着电泳图欲哭无泪。这种被称为"焦点模糊"的故障，堪称实验员的噩梦。实际上，90%的模糊问题都不是仪器质量问题，而是这7个细节没做到位！
一、焦点模糊的3大典型症状与真相

1. 全泳道弥漫性模糊

现象：整个凝胶像被蒙上一层白雾，条带边缘消失
真凶：缓冲液污染！

- 某医院检验科重复使用TAE缓冲液5次后，镁离子浓度升高导致核酸降解
- 检测技巧：取10μL缓冲液滴在pH试纸上，正常应显蓝色（pH7.4），若变红需立即更换

2. 条带边缘锯齿状模糊

场景：蛋白质电泳时，Marker条带出现毛刺
罪魁祸首：凝胶聚合不完全

- 实拍案例：某实验室用过期APS（过硫酸铵）制胶，聚合时间延长2倍仍有粘性
- 快速验证：用镊子轻触凝胶表面，若留下痕迹则未完全凝固

3. 局部区域模糊+清晰交替

诡异现象：凝胶中间清晰，两侧模糊
隐藏原因：电泳槽温度不均

- 北方冬季实验室曾出现：靠近暖气一侧的凝胶过热，DNA条带迁移率快20%

二、焦点模糊7步排雷流程（附工具清单）

第1步：样品预检

1. 取5μL样品+1μL loading buffer，点样到0.8%预凝胶
2. 用手机闪光灯侧照凝胶，若出现云雾状弥散，立即重新提取
关键工具：普通琼脂糖（非电泳用）、载玻片

第2步：凝胶质量诊断

- 煮胶水温监测：用食品温度计（精度±1℃）测量，琼脂糖需煮沸至95℃以上
- 凝固环境控制：远离通风口，室温静置30分钟（某公司因空调直吹，凝胶产生温差裂缝）

第3步：电极系统深度清洁

1. 铂金丝电极用30%硝酸浸泡5分钟（戴手套！）
2. 用万用表测电极间电阻：正常应＜10Ω，若＞50Ω需更换
省钱技巧：电极浸泡时加入1g活性炭，去污效率提升3倍

第4步：温度场均匀性测试

1. 在电泳槽内放置3支热电偶温度计（分别位于左中右）
2. 通电30分钟后记录温差，超过2℃需检查：

- 冷却系统是否开启（某高校因未开循环水，槽内温差达5℃）
- 风扇是否积灰（用压缩气罐吹扫散热孔）

第5步：上样操作优化

- 错误示范：移液器吸头戳破胶孔（90%新手都犯过）
- 标准动作：吸头距胶孔1mm处缓慢推样，上样量不超过孔体积的2/3

第6步：成像系统校准

1. 紫外灯管检测：照射白纸，若出现暗斑立即更换（附新旧灯管对比图）
2. 焦距调整：用100bp DNA Ladder校准，最佳焦距时条带边缘锐利度＞80%

三、焦点模糊经典案例复盘

案例：某生物公司单抗电泳焦点模糊事件

- 症状：IgG条带拖尾，轻链与重链分离不清

- 排查过程：

1. 样品检测：SDS-PAGE显示蛋白纯度＞95%（排除样品问题）
2. 凝胶复查：发现聚合时误加10×TEMED（催化剂过量）
3. 解决方案：重新制胶，TEMED按0.1%体积比添加

- 结果：条带锐利度恢复，分离度提升30%

四、终极避坑指南：这些操作必导致焦点模糊

1. 制胶禁忌TOP3

- 琼脂糖未完全溶解就倒胶（显微镜下可见未溶颗粒）
- 制胶板不水平（用气泡水平仪检测，偏差＞1°即重调）
- 加速剂TEMED添加量随意（必须用微量进样器）

2. 电泳操作红线

- 电压超过150V（条带迁移过快导致散热不均）
- 中途添加缓冲液（曾有实验员因此冲散已分离条带）

3. 成像错误操作

- 紫外照射时间超2分钟（核酸条带出现光解模糊）
- 相机焦距未锁定（自动对焦导致部分区域模糊）

本文由北京六一生物编辑整理。

北京六一生物科技有限公司创建于1970年，50多年的历史，公司先后3次承担电泳装置产品国家、行业标准的起草、修订工作，2009年负责《基础电泳装置》国家标准已发布实施。专业生产生物化学与分子生物学检验分析仪器的科技型国有企业。

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