DYCZ-26C型双向电泳仪使用指南：从原理到实战的全面解析

作者：六一生物发布时间：2025-08-01 09:27:13 点击：

玩双向电泳快三年，最开始用DYCZ-26C时，跑出来的胶像被猫抓过——斑点歪歪扭扭，背景还一片模糊。现在总算摸透了这台机器的脾气，每次都能跑出清晰整齐的蛋白点。其实双向电泳没那么玄乎，就是把蛋白先按等电点分，再按分子量分，跟给学生先按身高排队、再按体重分组一个道理。这篇就用大白话讲讲怎么用好DYCZ-26C型双向电泳仪这台仪器，从装机器到解决问题，全是实打实的操作经验。

一、DYCZ-26C型双向电泳仪产品概述

DYCZ-26C这台机器，体型不算大，长30厘米，宽16厘米，放实验台角落正合适，女生也能轻松搬动。它最核心的本事是"两步走"分离蛋白：第一步让蛋白在胶条里按等电点排好队（等电聚焦），第二步再让它们在凝胶里按分子量跑（SDS-PAGE），最后形成密密麻麻的斑点，每个点就是一种蛋白。

二、我为啥喜欢用它？主要是设计得实在：

- 最多能放12根胶条，平时做6个样本的对比实验刚好够用，不用分批跑
- 电压能从50V调到10000V，高电压阶段聚得快，低电压阶段跑得稳
- 外壳是透明的，电泳时能随时盯着胶条，不像有的机器黑黢黢的啥也看不见

有次实验室买了台进口的，功能看着花哨，但操作太复杂，光说明书就几百页。对比下来，DYCZ-26C的按钮简单明了，就三个键：启动、暂停、程序选择，新人看一遍演示就能上手。不过它也有小脾气，比如缓冲液加少了就会报错，电极没擦干净就跑不匀，得顺着它的性子来。

三、双向电泳仪的工作原理与技术特点

说原理前，先打个比方：如果把蛋白比作一群人，等电聚焦就像让大家按肤色深浅排队（等电点差异），SDS-PAGE就像让排好队的人再按身高跑（分子量差异），最后每个人站的位置都是独一无二的。

第一步等电聚焦，靠的是胶条里的pH梯度。蛋白在电场里会往自己"舒服"的pH区跑，跑到那儿就不动了——就像鱼儿只待在适合自己的水温层里。DYCZ-26C的胶条有好几种pH范围，我常用3-10的宽范围先扫一遍，发现感兴趣的蛋白点，再换窄范围的胶条（比如4-7）放大看，能把差0.2个pH的蛋白都分开。

第二步SDS-PAGE，就得让蛋白带上负电往前冲。这时候蛋白会变性成条状物，分子量小的跑在前头，大的慢悠悠跟在后面。DYCZ-26C的双板设计很贴心，能同时跑两块胶，做对照组和处理组对比特别方便，避免了分批实验的误差。

这台机器最让我惊喜的是重复性。有次做植物胁迫实验，同批样品跑了三次，软件比对下来，85%的蛋白点位置都重合，比以前用的老型号靠谱多了。不过它也怕极端情况：特别大的蛋白（超过200kDa）和膜蛋白容易跑丢，得提前在裂解液里加点特殊去垢剂才行。

四、实验前的准备工作

双向电泳就像请客吃饭，准备工作做足了，后面才顺当。我每次实验前都会列个清单，一条一条打勾，不然漏个试剂就得停工。

仪器检查得像给病人做体检：

- 电极丝有没有生锈？用软布擦到发亮为止，上次有根电极氧化了，跑出来的胶条一半清楚一半模糊
- 缓冲液槽里有没有结晶？用去离子水冲三遍，残留的盐会让电流乱跳
- 盖子盖紧了吗？轻轻晃一下，没声音才算合格，不然跑的时候会漏液

五、试剂准备是最容易踩坑的地方，分享几个保命技巧：

- 配尿素溶液时，别用热水！尿素遇热会分解出有毒的东西，蛋白碰到就变性，我一般用37℃水浴慢慢溶
- IPG缓冲液开封后放4℃，别冻起来，不然会分层，每次用前摇一摇
- 平衡缓冲液里的DTT和碘乙酰胺必须现加，提前配好的第二天就失效，这是我浪费了20根胶条才总结的教训

样品处理堪称灵魂步骤。我处理植物样品时，会在裂解液里加1%的PVP（聚乙烯吡咯烷酮），专门吸附酚类物质——没加的话，跑出来的胶黄得像橘子皮。蛋白浓度最好控制在5μg/μl左右，太低了点看不清，太高了点会糊成一片，用Bradford法测浓度时，我会多测两次取平均。

最后提醒一句，丙烯酰胺是神经毒，配胶时一定要戴手套，操作台面铺层报纸，洒出来好清理。我有次没戴手套，手上痒了好几天，大家千万别学我。

六、标准操作流程详解

1. 胶条水化：让蛋白"躺平"进入胶条

从冰箱拿出来的胶条，先在室温放10分钟，别直接拆包装，不然会结水珠。水化缓冲液按配方配好，加DTT的时候得称重，多一点少一点都会影响聚焦。

往水化盘里加样时，得像挤牙膏一样慢慢挤，让液体连成一条线，别出气泡。放胶条更得轻手轻脚，用镊子夹着两端，胶面朝下慢慢放，感觉胶条"吸"住液体了再松手。最后倒矿物油，要没过胶条，不然水分蒸发了，胶条会干得像饼干。

我一般晚上开始水化，早上来刚好能用，16小时不多不少。试过8小时加急，结果蛋白没完全进去，点又少又淡。

2. 等电聚焦：给蛋白"分队伍"

把水化好的胶条移到聚焦槽，胶条两端要对准电极，就像插头得插进插座才通电。再盖一层新的矿物油，上次偷懒用了旧油，里面的杂质让胶条边缘糊了。

聚焦程序我从来不动预设的，30V泡12小时，500V冲1小时，最后8000V跑3小时，机器会自己跳步骤。有次好奇调了参数，想让它跑快点，结果蛋白跑过了头，点全堆在边上。

聚焦时别总开盖子看，温度变化会让电流不稳。实在想看看，就透过透明壳子瞅一眼，胶条没鼓包、没发白就没问题。

3. 胶条平衡：给蛋白"换衣服"

这步就像给参加跑步比赛的人换运动服。先在平衡液A里加DTT，让蛋白舒展开；再换平衡液B加碘乙酰胺，固定住形状。每次都用新配的，别省这点钱。

平衡时用摇床慢慢晃，速度太快胶条会从管里滑出来。15分钟一到就赶紧换液，多泡5分钟，蛋白就会从胶条里跑丢一部分。我一般设两个闹钟，免得忘了时间。

平衡完的胶条用滤纸轻轻吸一下，别使劲擦，不然蛋白点会被擦掉，边缘吸到不滴水就行。

4. 第二向电泳：让蛋白"比跑步"

预制胶提前1小时从冰箱拿出来回温，太冷的话会凝住。胶条往胶上放时，对准中间位置，用镊子轻轻按一下，听到"啵"的一声就说明贴紧了，别留气泡，不然蛋白跑不过去。

封胶的琼脂糖得煮到完全透明，稍凉一点再倒，太烫会把胶条烫坏。倒的时候沿玻璃板慢慢流，像浇花一样，别冲得胶条移位。

电泳时先开1W跑1小时，让蛋白都进入凝胶，再调到20W。溴酚蓝跑到胶底1厘米时就断电，别等跑出胶外，小分子蛋白会跟着跑丢。有次忘看时间，结果最下面的点全没了，心疼得要命。

七、常见问题与实战技巧

跑胶多了，啥奇葩问题都遇见过，分享几个高频问题的解决办法：

1、斑点拖尾像彗星：十有八九是盐没除干净。样品离心时多甩5分钟，聚焦时500V阶段延长半小时，让盐先跑出去。

2、背景太脏像麻子脸：要么是染色液没洗干净，要么是样品里杂质多。我现在染色后用去离子水摇着洗，每次换三次水，背景干净多了。

3、胶条边缘翘起来：水化时矿物油加少了，胶条干了。现在我宁可多倒点油，反正能回收过滤再用。

4、斑点歪歪扭扭：电极没擦干净！每次用前用酒精棉擦电极，保证发亮，这点最容易被忽略。

5、最后说个省钱小技巧：胶条可以重复用吗？试过一次，把用过的胶条用去离子水泡2小时，重新水化上样，虽然点少了点，但预实验时能省点钱。正式实验还是别省，数据要紧。

用DYCZ-26C型双向电泳仪这两年，最大的体会是：机器比人实在，你对它用心，它就给你好看的数据。每次看到那些排列整齐的蛋白点，就像看到自己种的菜丰收了，特有成就感。新手别怕犯错，我第一次跑废的胶条能堆成小山，现在不也能熟练操作？按步骤来，多观察，你也能玩转双向电泳。

本文由北京六一生物编辑整理。

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