DYCP-32A型琼脂糖水平电泳仪操作全指南：原理、步骤与故障排除

作者：六一生物发布时间：2025-12-16 09:17:35 点击：

DYCP-32A型是北京六一推出的大号琼脂糖水平电泳仪，主打高通量核酸分离、鉴定与制备，适配DNA/RNA样本批量检测，核心依托琼脂糖凝胶的分子筛效应与电场中核酸的电荷迁移原理实现分离，以下是从原理到故障的完整操作指南。

一、核心工作原理

1. 分子筛效应：琼脂糖凝胶具有多孔网状结构，不同分子量的核酸片段在凝胶中迁移时，分子量越小的片段越容易穿过凝胶孔隙，迁移速度越快；分子量大的片段受阻明显，迁移速度慢，以此实现不同片段的分离。
2. 电荷迁移原理：核酸分子本身带负电荷，在电场作用下会向正极方向移动。DYCP-32A型的电极间距设计均匀，能形成稳定匀强电场，保证核酸片段迁移方向一致、条带整齐，提升分离精度。
3. 染料示踪原理：电泳时加入溴酚蓝、二甲苯青等指示剂，其迁移速度与特定分子量核酸片段相近，可直观判断电泳进程；后续通过EB或GelRed等核酸染料染色，在紫外灯下能清晰观察到核酸条带位置。

二、完整操作步骤（高通量核酸实验适配版）

1. 实验前期准备

- 仪器与耗材检查

- 检查DYCP-32A型电泳槽主体，确保胶室无裂纹、电极无氧化生锈，缓冲液槽无渗漏；搭配适配电源（推荐DYY-6C/12C型，输出电压适配0-300V），确认电源线连接完好。
- 准备耗材：琼脂糖粉末、TAE/TBE缓冲液、核酸染料、25齿或多齿点样梳、移液器及吸头、核酸样品与Loading Buffer。

- 缓冲液配制

- 配制50×TAE浓缩液（Tris-乙酸-EDTA）或10×TBE浓缩液，实验时稀释为1×工作液；DYCP-32A型槽体容量大，单次需准备约800-1000mL 1×缓冲液，保证后续电泳时液面没过凝胶2-3mm。

- 样品预处理

- 核酸样品与Loading Buffer按5:1比例混合，涡旋混匀后短暂离心，避免样品残留管盖；若样品浓度过高，可用TE缓冲液稀释，防止上样后条带拖尾。

2. 凝胶制备（适配DYCP-32A大号胶室）

- 依据核酸片段大小确定琼脂糖浓度：分离大片段DNA（＞10kb）用0.8%浓度，中片段（1-10kb）用1.0%-1.2%，小片段（＜1kb）用1.5%-2.0%。
- 称取对应质量琼脂糖，加入1×TAE/TBE缓冲液，微波炉加热至完全溶解，期间每隔30秒摇匀一次，避免琼脂糖局部过热碳化。
- 待凝胶溶液冷却至50-60℃时，加入核酸染料（如GelRed，按1:10000比例），轻轻混匀，避免产生气泡。
- 将DYCP-32A型电泳槽的胶室托盘放平稳，放入梳子（梳齿距离托盘底部0.5-1mm），倒入凝胶溶液；凝胶厚度控制在3-5mm，确保适配槽体尺寸，室温静置20-30分钟至完全凝固。

3. 上样与电泳

- 凝胶凝固后，小心拔出梳子，避免加样孔破损；将胶室托盘放入电泳槽，倒入1×缓冲液，液面需没过凝胶表面2-3mm。
- 用移液器吸取预处理后的样品，斜角45°对准加样孔缓慢加样，DYCP-32A型支持多排加样孔，高通量实验可按顺序批量上样，每孔上样量建议10-20μL，避免样品溢出污染相邻孔。
- 盖好电泳槽盖子，注意正负极方向：核酸带负电，需将加样孔一侧接负极，另一侧接正极，防止样品反向迁移。
- 开启电源，设置电泳参数：推荐恒压模式，电压50-80V，电泳时间根据片段大小调整，通常40-60分钟，待指示剂迁移至凝胶2/3处时停止电泳。

4. 染色与成像

- 若电泳前未加入染料，可采用后染色法：将凝胶放入染料工作液中浸泡15-20分钟，用清水漂洗5分钟去除多余染料。
- 将染色后的凝胶放入凝胶成像系统，调整紫外灯波长与焦距，拍摄条带图像，记录核酸片段的位置与亮度，用于后续分子量分析或定量检测。

三、常见故障排查与解决方案

1. 条带无分离/严重拖尾

- 原因1：凝胶浓度与核酸片段不匹配

解决方案：小分子核酸用高浓度凝胶（1.5%-2.0%），大分子用低浓度（0.8%-1.0%）；重新制胶，确保琼脂糖完全溶解且浓度准确。

- 原因2：上样量过多或样品浓度过高

解决方案：将样品用TE缓冲液稀释，降低上样量至10-15μL；上样时缓慢推液，避免样品溢出加样孔。

- 原因3：电场强度过高或缓冲液失效

解决方案：降低电压至50-60V，避免凝胶发热；缓冲液需现配现用，禁止反复使用，确保离子强度稳定。

2. 条带模糊/弥散

- 原因1：凝胶中有气泡或加样孔破损

解决方案：灌胶前静置凝胶溶液消泡，若有气泡可用针头挑出；拔梳时轻缓操作，加样孔破损则需重新制胶。

- 原因2：样品降解或含杂质

解决方案：核酸样品需低温保存，避免核酸酶污染；用柱纯化或酚氯仿抽提去除蛋白、多糖等杂质，提升样品纯度。

- 原因3：电泳时间过长，条带扩散

解决方案：缩短电泳时间，当指示剂迁移至凝胶2/3处时及时停止；避免核酸片段过度迁移导致弥散。

3. 无条带显示

- 原因1：正负极接反，样品跑出凝胶

解决方案：电泳前确认电极方向，加样孔一侧必须接负极；若已接反，需重新制胶并调整电极连接。

- 原因2：染料浓度不足或染色时间不够

解决方案：按说明书比例添加染料，后染色时延长浸泡时间至20分钟；更换新鲜染料，避免染料失效。

- 原因3：样品未加入Loading Buffer，无法沉降

解决方案：补加Loading Buffer并混匀，确保样品能沉入加样孔底部，再重新上样电泳。

4. 电极氧化，条带偏移

- 原因：电极长期未清洁，表面氧化生锈，导致电场不均
解决方案：实验后用蒸馏水冲洗电极，去除缓冲液残留；若电极氧化严重，用砂纸轻轻打磨氧化层，或联系厂家更换电极。

四、仪器维护与保养

1. 实验结束后，及时倒出电泳槽内的缓冲液，用蒸馏水冲洗槽体与胶室托盘，擦干后存放，避免残留缓冲液腐蚀电极。
2. 梳子、托盘等配件需清洗干净，晾干后单独存放，防止变形；琼脂糖凝胶残留可用温水浸泡后擦拭去除。
3. 仪器长期不用时，需放入防尘罩，置于干燥通风环境，避免潮湿导致电路故障；定期检查电极与电源线，确保无破损。

需要我帮你整理一份DYCP-32A型电泳仪高通量实验参数表吗？里面会包含不同核酸片段对应的凝胶浓度、电压和电泳时间，方便你直接参考使用。

本文由北京六一生物编辑整理。

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