电泳仪操作技巧大揭秘：让实验结果更精准

    做分子实验的第五年，我前两年几乎都在跟电泳仪 “较劲”—— 条带跑歪、Marker 分不清楚、甚至胶没凝好就漏液，光返工就浪费了几十块胶和上百个样品。后来跟着实验室的老教授学了不少实操技巧，现在跑胶成功率能到 95% 以上，连新手师妹跟着我的方法做，第一次就能跑出清晰条带。今天把这些实打实的操作心得分享出来，全是避开坑的经验，比看说明书有用多了。

一、灌胶别凭感觉！3 个细节做好，胶凝得又快又均匀

灌胶是跑胶的第一步，也是最容易出问题的一步。以前我总觉得 “倒进去等凝就行”，结果要么胶里有气泡，要么凝得不均匀，跑出来的条带歪歪扭扭。现在掌握了 3 个技巧，灌胶再也没出过错。

1. 胶液温度别太高，45℃倒刚好

第一次灌胶时，我刚煮好的胶液（大概 60℃）直接倒进槽里，结果胶槽底部的密封垫被烫变形，胶全漏了，还得重新煮胶。后来老教授告诉我，胶液煮好后要等凉到 45℃再倒，用手摸一下烧瓶外壁，不烫手就行。现在我会把煮好的胶液放在 37℃水浴锅里温着，倒的时候温度刚好，胶槽也不会被烫坏，灌完 15 分钟就能凝，比以前等凉到室温快了 10 分钟。

2. 倒胶要慢，顺着槽壁流，别裹气泡

以前倒胶总跟 “赶时间” 似的，猛一倒就裹进好多气泡，用牙签挑半天还挑不干净，跑胶时气泡处的条带直接断了。现在我倒胶时会把烧瓶嘴贴着胶槽内壁，慢慢倾斜烧瓶，让胶液顺着槽壁流下去，像倒红酒一样轻，基本不会裹气泡。如果偶尔有小气泡，用牙签尖轻轻戳一下，气泡就会浮上来，比以前挑气泡省了 5 分钟。

3. 梳子别插太早，胶液凝到 “半固体” 再插

新手最容易犯的错就是灌完胶立马插梳子，结果胶没凝住，梳子一插就歪，还会把胶戳出洞。我现在灌完胶会等 3 分钟，用手指轻轻碰一下胶液表面，感觉有点黏但不粘手（像刚凝固的果冻），再慢慢把梳子插进去，插的时候要垂直，别左右晃，这样梳孔又正又整齐，上样时不会漏液。上次师妹按我的方法做，梳孔比她之前歪歪扭扭的样子整齐太多，上样一次就成功。

二、上样不是 “倒进去就行”！2 个技巧避免样品浪费

上样时手一抖、加错量，整板胶可能就白跑了。我以前上样时加错过孔、溢过样，浪费了不少珍贵样品，后来总结出 2 个技巧，上样又快又准。

1. 样品里加 loading buffer，比例别错

第一次跑胶时，我忘了加 loading buffer，样品直接沉到胶槽底部，跑出来根本没条带，还以为仪器坏了。后来才知道，loading buffer 不仅能让样品沉到孔底，还能指示跑胶进度。现在我每次都按 “样品:loading buffer=5:1” 的比例加，比如 10μL 样品加 2μL buffer，混合均匀后再上样，条带能准确定位，还不会扩散。
有次师妹图省事，按 10:1 的比例加，结果 loading buffer 不够，样品在孔里扩散，跑出来的条带又宽又模糊，只能重跑。所以比例千万别省，该加多少就加多少，不然浪费的是样品和时间。

2. 用排枪上样，速度快还不手抖

以前用单道移液器上样，20 个样品得加 6 分钟，手酸得不行，还容易加错孔。现在换成 8 通道排枪，先把样品按顺序在离心管架上摆好，吸一次能加 8 个样，3 分钟就能上完，手也不酸了。上样时我会盯着梳孔的边缘，排枪头对准孔中间，慢慢推活塞，别太快，不然样品会溢出来。上次带本科生上样，用排枪的同学没一个加错孔，比用单道移液器的成功率高太多。

三、跑胶参数别瞎调！根据样品类型选，条带更清晰

跑胶时电压、时间调错，条带要么跑太快糊了，要么跑太慢浪费时间。我以前总凭感觉设参数，跑 100bp 的小片段用 120V，结果条带跑过了头；跑 5kb 的大片段用 80V，跑了 1 小时还没到位置。后来摸清了规律，按样品类型设参数，条带一次就清。

1. 小片段（100-1000bp）：高电压快跑，别太久

跑 100-1000bp 的 PCR 产物或小 Marker，我会用 120-130V 的电压，时间设 25-30 分钟。比如跑 200bp 的片段，120V 跑 28 分钟刚好，条带又细又清晰，不会跑过。上次跑 300bp 的样品，我用 130V 跑了 25 分钟，比平时快 5 分钟，条带照样清楚，赶实验时这个方法特别管用。

2. 大片段（1kb 以上）：低电压慢跑，别着急

跑 1kb 以上的质粒或基因组 DNA，得用低电压慢慢跑，不然条带会弥散。我跑 5kb 的质粒时，用 80-100V 的电压，时间设 40-50 分钟，比如 80V 跑 45 分钟，条带能分清楚超螺旋、线性和开环三种形态，不会糊在一起。有次我图快，用 110V 跑 5kb 的质粒，结果条带跑成了一团，只能重新准备样品，又花了 2 小时，太不值了。

3. 中途别总开盖子，避免温度波动

以前跑胶时总忍不住开盖子看进度，结果胶槽里的温度忽高忽低，条带跑得歪歪扭扭。现在我会在胶槽里放个温度计，跑胶时温度控制在 30℃以内，只要温度稳定，就不轻易开盖子，等时间快到了再看。上次跑胶时室温有点高，我在胶槽旁边放了个冰袋，温度控制在 28℃，条带比之前没放冰袋时整齐多了。

四、收尾别偷懒！2 个步骤做好，下次实验更顺利

跑胶结束后别着急拆胶，做好这 2 步，不仅能保护仪器，还能让下次实验更省心。

1. 先关电源再拆胶，别带电操作

第一次拆胶时，我忘了关电源，手碰到电极差点触电，现在每次都先关电源，拔掉插头，再拆胶槽。拆胶时要轻，别用力掰，不然胶槽的密封垫容易坏，下次灌胶会漏液。我之前有个胶槽就是因为拆得太用力，密封垫坏了，灌一次漏一次，换个密封垫花了 50 元，还耽误了实验。

2. 及时清理胶槽和电极，别留残留

跑胶后胶槽里会有胶渣和缓冲液残留，不清理的话，下次跑胶时会影响电流，条带也会歪。我每次拆完胶，都会用清水把胶槽冲干净，电极用软布擦一下，要是有盐结晶，就用 10% 的柠檬酸溶液泡 5 分钟，再冲干净。现在我的电泳仪用了 3 年，电极还是亮银色，电流一直很稳定，比实验室里没清理过的仪器好用多了。

结尾：技巧不是 “花架子”，是少走弯路的经验

做电泳实验这么多年，最大的感受是：没有 “难用” 的仪器，只有没掌握的技巧。以前总觉得跑胶靠 “运气”，后来才发现，灌胶时控制好温度、上样时选对工具、跑胶时调好参数，这些细节做好了，条带自然会清晰。
现在我带新手做实验，都会把这些技巧教给他们，看着他们第一次就能跑出清晰条带，不用像我以前那样反复返工，特别有成就感。其实这些技巧都很简单，只要多练几次，每个人都能成为 “跑胶高手”—— 毕竟实验已经够累了，能少走点弯路，多省点时间，不是很好吗？


本文由北京六一生物编辑整理。

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