DYCP-32C型琼脂糖水平电泳仪操作全攻略

作者：六一生物发布时间：2025-12-26 09:00:02 点击：

DYCP-32C作为北京六一的大号琼脂糖水平电泳仪，以桥式设计、高通量试样格与开盖断电安全保护为核心优势，适配批量核酸分离与制备，以下从全流程操作、参数优化、维护保养到故障排查，给出完整实操攻略，确保结果稳定与效率提升。

一、核心参数与前期准备

1. 核心规格

- 凝胶板适配250×250mm/120×250mm/60×250mm，试样格可选51/42/26齿（1.0mm/2.0mm厚），缓冲液总容量约1600mL，支持8道/12道排枪高通量上样，开盖断电保障操作安全。

2. 试剂与耗材选型

- 缓冲液：TAE适合快速大片段分离，TBE分辨率更高（小片段优先），均需现配现用，1×工作液，避免反复使用导致pH偏移。
- 琼脂糖浓度：0.7%–1.0%适配1–20kb大片段，1.5%–2.0%适配50–1000bp小片段，RNA分析可用含甲醛的变性胶。
- 辅助耗材：核酸染料（如GelRed）、Loading Buffer（6×）、DNA Marker、移液器与吸头、凝胶成像系统。

二、完整操作流程（制胶→电泳→成像）

1. 制胶（关键防气泡与浓度适配）

（1）组装制胶模块：用封胶堵板固定凝胶托盘与隔板，确保密封无渗漏；根据样本量选试样格（51齿适配96孔板样本），水平插入托盘，梳齿底部与托盘间距1–2mm。
（2）配胶加热：按比例称取琼脂糖，加入1×缓冲液，微波加热至完全透明（避免暴沸），冷却至60℃时加入核酸染料（如GelRed，终浓度1×），轻轻混匀。
（3）倒胶凝固：缓慢倒入凝胶托盘，排除气泡；室温静置30–60分钟至凝胶完全凝固，呈乳白色半透明状。

2. 胶板安装与缓冲液添加

1. 拔梳与入槽：垂直轻拔试样格，避免撕裂加样孔；将胶板平稳放入电泳槽，加样孔侧朝向负极（黑色接线端）。
2. 加缓冲液：倒入1×缓冲液，液面没过凝胶表面2–3mm，确保电场均匀，避免边缘电阻不均。

3. 样品上样与电泳运行

（1）样品预处理：DNA与6×Loading Buffer按5:1混合，每孔上样量10–15μL（不超过孔容积80%），边缘孔加入Marker用于分子量比对。
（2）上样操作：移液器斜角45°对准加样孔中心，缓慢匀速推液，防止样品溢出污染邻孔，排枪加样按从左到右顺序，提升效率。
（3）参数设置：盖好上盖，电极线对应连接（负极接加样孔侧）；开启电源选恒压模式，50–70V（5–10V/cm胶长），避免高电压发热；电泳时间40–60分钟，溴酚蓝迁移至凝胶2/3处时停止。

4. 染色与成像

（1）染色方式：内染法（制胶时加染料）电泳后可直接成像；外染法将凝胶放入染色液浸泡15–20分钟，清水漂洗5分钟去背景。
（2）成像分析：将凝胶放入成像系统暗箱，选择254nm或302nm紫外波长，调整焦距与曝光时间，保存图像并分析条带大小与亮度。

三、参数优化与高通量适配技巧

1. 电压与时间匹配：小片段（＜1kb）用70–100V，20–30分钟；中大片段（1–10kb）用50–70V，40–60分钟；长片段（＞10kb）建议4℃冷却电泳，避免条带扩散。
2. 高通量上样优化：51齿试样格搭配8道/12道排枪，上样时间缩短至传统操作的1/3；Marker提前5分钟预沉降，防止条带歪斜。
3. 缓冲液管理：桥式结构可减少用量，批量检测时可快速补液，最多回收使用2次，防止离子浓度下降影响分离效果。

四、日常维护与清洁规范

1. 即时清洁：电泳结束后，拆下电极架与试样格，用蒸馏水冲洗槽体与电极，去除缓冲液残留与染料沉积；电极用75%酒精擦拭消毒，避免盐结晶腐蚀。
2. 定期保养：每月检查电极导电性与封胶密封性，损坏及时更换；凝胶托盘与制胶器分开存放，避免交叉污染；长期不用时干燥存放，防止霉变。

五、安全与效率提示

1. 电泳时避免触摸电极与缓冲液，开盖断电功能需确保正常启用，防止触电。
2. 染料操作戴手套，避免直接接触；紫外成像时使用防护眼镜，防止眼部损伤。
3. 批量检测时采用预制内染胶，减少染色步骤，电泳结束直接成像，提升流程效率。

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本文由北京六一生物编辑整理。

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