DYCP-37B 等电聚焦条带模糊？3 个关键操作细节帮你救回实验

作者：六一生物发布时间：2025-09-01 09:11:30 点击：

盯着凝胶成像仪里那团模糊的条带，我心里直冒火——这是第三批用DYCP-37B跑的血清蛋白样本了，每次条带都像蒙了层毛玻璃，连最明显的主带都糊成一片。这批样本是师姐花半个月提的，再出不来结果，项目就得延期。

我翻遍前两次的记录，操作步骤明明都按说明书来：胶浓度没错，聚焦程序也设的800V恒压，怎么就是跑不清晰？正对着废胶发呆时，实验室的李老师路过，瞥了眼成像图就问：“你脱气的时候是不是没等气泡排干净？”这句话，成了我排查问题的突破口。

一、胶没脱好气：小气泡藏隐患，条带必跑糊

问题表现：第一次跑胶，条带歪歪扭扭，边缘像被水泡过一样模糊。

踩坑经历：配好丙烯酰胺溶液后，我把烧杯塞进真空干燥器，抽了不到1分钟，见表面冒了几个小泡就赶紧拿出来倒胶。倒完才发现胶槽底部沾了几个细气泡，我戳了戳没戳破，就懒得管了。

为什么会这样？

李老师解释：DYCP-37B的胶槽比普通电泳槽深，没排干净的小气泡会藏在胶底，聚合后形成“小空洞”。蛋白在电场里迁移时，遇到空洞就会绕路，条带自然就糊了。

正确做法，两步搞定：

1. 脱气要彻底：抽真空时盯着烧杯，直到表面完全不冒气泡，再多抽3分钟，确保深层气泡也排干净；
2. 倒胶要慢稳：让溶液顺着胶槽壁缓缓流下，别搅动出新风泡。倒完的胶板对着光看，完全透明没杂质，才算是合格的。

二、电极液pH不准：差0.8就翻车，条带变“花脸”

问题表现：第二次跑胶，条带不仅糊，还横着拉了好几条纹，像被刷子刷过。

踩坑经历：配电极液时，我用了没校准的pH计，看指针指在7.3就以为对了。结果李老师用校准过的pH计一测，实际pH是8.1，差了整整0.8！

为什么会这样？

等电聚焦特别“挑”pH精度。李老师说：“DYCP-37B的电极反应很敏感，pH差0.2就会让蛋白聚焦偏移，差0.8直接就乱了。”而且我还把用过的电极液倒回瓶里反复用，里面混了蛋白残留，pH只会越来越不准。

正确做法，两点牢记：

1. 配液前校准pH计：先用4.0和6.86的标准液把pH计调准，再配电极液，反复测3次，确保误差不超0.1；
2. 电极液别重复用：每次跑胶都新配，哪怕剩得多也直接倒掉，避免蛋白残留影响pH。

三、电压升太快：一上来就800V，蛋白全“冲散”

问题表现：第三次跑胶，条带不糊了，但宽得像条带子，没法分析。
踩坑经历：前三次我都直接设“800V恒压跑180分钟”，觉得高压能让蛋白快点聚焦，结果反而适得其反。

为什么会这样？

李老师打了个比方：“这就像赶羊，一下子用强电冲，蛋白还没在等电点站稳就被冲散了，条带怎么可能窄？”

正确做法，阶梯升压是关键：

按“低→中→高”分三阶段设电压，总时间还是180分钟，但效果天差地别：
1. 第一步200V/30分钟：让蛋白在低电压下慢慢“归位”，初步聚在一起；
2. 第二步500V/60分钟：把分散的蛋白聚成粗带，打好基础；
3. 第三步800V/90分钟：精细聚焦，让条带变窄变锐利。

另外，聚焦结束后别着急拆胶，断电后让胶在电极板上再放5分钟，蛋白稳定后再染色，边缘会更清晰。

四、总结：做好3个细节，条带清晰不翻车

现在每次用DYCP-37B跑等电聚焦，我都会先检查这三点，再也没出过条带模糊的问题：

1. 胶溶液脱气至少3分钟，倒胶慢稳无气泡；
2. 电极液配前校准pH计，每次都用新配的；
3. 聚焦电压按“200V→500V→800V”阶梯升，结束后静置5分钟。

其实很多实验翻车，都不是仪器不好用，而是细节没做到位。这三个细节看起来简单，但只要做好了，就能帮你少浪费样本、少走弯路，轻松跑出清晰条带。下次再遇到条带模糊，不妨从这几点查起，说不定很快就能解决问题！

本文由北京六一生物编辑整理。

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