初次操作电泳仪常犯的5个错误及纠正方法

作者：六一生物发布时间：2025-09-12 08:49:53 点击：

作为实验室新手，第一次独立操作电泳仪时，很容易因对仪器原理、操作细节不熟悉踩坑——比如胶没跑开就断电、条带歪得没法分析，甚至不小心损坏仪器。结合数十位新手实验员的实操反馈，总结出初次操作电泳仪最常犯的5个错误，每个错误都对应具体纠正方法和避坑技巧，帮你快速上手、少走弯路。

一、错误1：电极接反，条带“反向逃跑”

新手常见场景

第一次接电泳仪电源时，看电极柱颜色凭感觉接——把红色线接在仪器黑色电极柱上，开机跑胶20分钟后，发现点样孔附近聚了一团模糊的条带，胶的另一端却空空如也，才意识到条带跑反了。

错误原因

电泳仪的分离原理是“带电颗粒向相反电极移动”：DNA、蛋白质等带负电的样本，会向正极（红色电极）移动。若正负极接反，样本会反向迁移到点样孔下方的胶里，甚至跑出胶外，导致实验失败。新手容易忽略“仪器电极柱标注”，或混淆电源输出线与仪器电极的对应关系。

纠正方法

1. 认准“三色标注”：电泳仪电极柱通常标有颜色和符号——红色（+）为正极、黑色（-）为负极，电源输出线也对应红（+）、黑（-）色，接线时必须“红接红、黑接黑”，接好后再对照仪器说明书确认1次；
2. 做“预实验验证”：若不确定是否接反，可先取少量Marker点样，用低电压（50V）跑5分钟，观察Marker是否向正极方向移动（通常正极在胶的“下方”，即远离点样孔的一端）；
3. 贴“操作提示贴”：在仪器电极柱旁贴一张便签，注明“红=正，接电源红线”，避免下次操作时遗忘。

避坑技巧

部分垂直电泳仪的电极隐藏在槽内，可通过“点样孔位置判断”：点样孔所在的一侧对应负极，胶的另一侧对应正极，接线时确保电源正极与胶的“非点样孔侧”电极连接。

二、错误2：缓冲液加太少，胶“干跑”导致条带模糊

新手常见场景

为了节省试剂，只往电泳槽里加少量缓冲液，刚好没过胶的边缘就开机。跑胶过程中发现胶面逐渐变干，最后跑出来的条带又淡又模糊，连Marker的主要条带都分不清。

错误原因

缓冲液的作用是“传导电流+维持稳定pH环境”，若液面过低，电流无法均匀通过凝胶，会导致局部温度过高、胶面失水收缩，样本无法正常迁移；同时，pH值波动会破坏样本带电性，让条带扩散、模糊。新手容易误以为“缓冲液只要没过胶就行”，忽略仪器说明书上的“液面高度标准”。

纠正方法

1. 按仪器刻度加液：水平电泳仪槽内通常有“最低液面线”（标注“MIN”），缓冲液需加到液面没过胶面1-2mm；垂直电泳仪需分别往“内槽”和“外槽”加液，内槽液面要没过玻璃板上沿，外槽液面与内槽平齐，避免液面差导致电流不均；
2. 用“统一量具”：每次加缓冲液用固定的500mL烧杯量取，确保每次加液量一致，避免凭感觉加液导致液面忽高忽低；
3. 检查“渗漏情况”：加液后静置3分钟，观察槽体是否有液体渗漏，若渗漏需先处理（如更换密封圈），再补充缓冲液，防止跑胶过程中液面下降。

避坑技巧

缓冲液建议现配现用，若用上次剩余的缓冲液，需先测pH值（应在8.0-8.5之间，适合多数核酸、蛋白电泳），pH值偏离过大要重新配制，避免影响条带分离效果。

三、错误3：电压设置过高，胶“烧糊”还跑丢条带

新手常见场景

想快点出结果，第一次跑胶就把电压设到200V（仪器最高电压），开机10分钟后闻到焦糊味，发现胶的边缘已经发黄、变形，赶紧关机后，胶里的条带全跑成了“拖尾”，根本无法分析。

错误原因

电压过高会导致“电流过大、产热过多”：凝胶（尤其是琼脂糖胶）耐热性差，温度超过40℃就会软化变形，甚至融化；同时，样本迁移速度过快，条带来不及分离就扩散，出现“拖尾”“连条”现象。新手容易误解“电压越高，跑胶越快”，忽略不同凝胶类型、样本类型对应的电压标准。

纠正方法

1. 按“凝胶类型定电压”：
- 琼脂糖凝胶（核酸电泳）：1%-2%浓度的胶，电压设为80-120V，每厘米胶长度对应5-8V（如10cm长的胶，电压80-100V）；
- 聚丙烯酰胺凝胶（蛋白电泳）：浓缩胶阶段用80V（让样本浓缩成一条线），分离胶阶段用120V（缓慢分离条带），避免全程高电压；
2. 看“电流变化”调整：跑胶时观察仪器显示屏上的电流值，若电流突然飙升（如超过200mA），说明电压过高，需立即调低电压，防止胶被烧糊；
3. 设“定时提醒”：根据胶的长度、电压计算跑胶时间（如10cm胶、100V电压，约需40-50分钟），用手机设定时提醒，避免因着急调高压。

避坑技巧

夏季实验室温度高时，可在电泳槽外贴一层冰袋，降低缓冲液温度，防止胶因过热变形。

四、错误4：点样时“戳破胶”，样本漏到槽里

新手常见场景

用移液枪点样时，枪头用力过猛，直接戳穿凝胶的点样孔底部，样本没留在孔里，反而漏到电泳槽的缓冲液中，跑胶后点样孔处几乎没有条带，白浪费了珍贵的样本。

错误原因

新手对“移液枪力度控制”不熟练，或不了解凝胶的硬度——琼脂糖胶（尤其是低浓度1%以下的胶）质地较软，枪头稍用力就会戳破点样孔；另外，点样时移液枪角度过陡（垂直对着孔），也容易戳破胶。

纠正方法

1. 练“枪头控力”：点样前先用废胶练习——将移液枪调至10μL，吸少量水，枪头斜着（与胶面呈45°角）靠近点样孔，轻轻将水挤入孔中，感受“不戳破胶的力度”，反复练习5-10次；
2. 用“短枪头+慢操作”：选择0.2mL的短枪头（比长枪头更容易控制深度），点样时枪头尖端刚好接触点样孔边缘，缓慢按下推杆，让样本自然流入孔中，避免快速推枪；
3. 看“胶的厚度”调整：若胶较薄（如小于5mm），点样量控制在5-10μL，枪头只进入孔内1-2mm，防止戳穿胶底。

避坑技巧

点样后不要立即开机，静置5分钟让样本在孔内“沉降”，避免样本扩散到缓冲液中，同时检查点样孔是否有破损、样本是否漏出。

五、错误5：跑胶后“直接拔电源”，条带没固定好就脱色

新手常见场景

看到条带跑到胶的中间位置，觉得“差不多了”，直接拔掉电泳仪电源，把胶捞出来就放进脱色液里。结果脱色后，条带变得又淡又模糊，部分条带甚至“消失”了。

错误原因

跑胶后直接断电，胶内的样本还处于“未完全固定”的状态，此时转移胶或放入脱色液，样本会继续扩散；另外，新手容易凭“主观判断”停胶，没等条带完全分离就结束实验，导致条带重叠、无法分析。

纠正方法

1. 按“Marker位置停胶”：跑胶时重点观察Marker条带——当Marker的最小编号条带（如100bp）跑到胶的2/3处，或最大编号条带（如5000bp）跑到胶的1/2处时，再断电，此时样本条带已充分分离；
2. “先关电源再拔线”：停胶时先按仪器“关机键”，待显示屏熄灭后，再拔掉电源插头，避免突然断电导致仪器参数紊乱；
3. “快速固定再脱色”：捞出胶后，先放入固定液（如70%乙醇+0.5%乙酸）浸泡10分钟，让条带固定在胶上，再进行脱色、染色操作，防止条带扩散。

避坑技巧

在电泳槽旁放一张“Marker迁移对照表”，标注不同电压下Marker各条带的迁移时间，按表判断停胶时机，比主观判断更准确。

新手实操总结：3个“零失误”关键步骤

1. 操作前“三确认”：确认正负极接线正确、缓冲液加至标准液面、电压设置符合凝胶类型；
2. 操作中“三观察”：观察电流是否稳定、胶面是否有异常（如发热、变形）、Marker迁移方向是否正确；
3. 操作后“三步骤”：按Marker位置停胶、先关电源再拔线、固定胶后再脱色。

其实，初次操作电泳仪不用怕犯错，关键是了解错误原因、掌握纠正方法。按以上技巧操作，多数新手能在1-2次实验后熟练上手，跑出清晰、规整的条带。如果遇到不确定的细节，及时对照仪器说明书或请教实验室前辈，比自己盲目试错更高效。

本文由北京六一生物编辑整理。

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