DYCZ - 24K双板垂直电泳仪样本上样后扩散严重

作者：六一生物发布时间：2025-02-09 09:14:11 点击：

在使用DYCZ - 24K双板垂直电泳仪进行实验时，样本上样后扩散严重是一个让人头疼不已的问题。它不仅打乱了实验节奏，还让实验人员担心实验是否还能继续进行并获得准确结果。别着急，下面我们就深入剖析DYCZ - 24K双板垂直电泳仪这一现象的原因、对实验的影响，以及是否有办法挽救实验。

一、样本上样后扩散严重的常见原因

1. 样本浓度过低：当样本浓度过低时，样本中的生物大分子在凝胶孔中分散程度较大，相互之间的作用力较弱。在电场的作用下，这些分子更容易受到周围环境因素的影响，如缓冲液的流动、热运动等，从而导致扩散严重。例如，在进行蛋白质电泳实验时，如果蛋白质样本浓度过低，蛋白质分子在凝胶孔中分布稀疏，难以形成紧密的条带，容易向周围扩散。

2. 样本黏度不合适：样本的黏度对其在凝胶孔中的行为有重要影响。黏度过低，样本流动性过大，在上样时难以控制，容易溢出并向周围扩散；而黏度过高，样本不易进入凝胶孔，且在电场作用下，过高的黏度会阻碍样本分子的正常迁移，也可能引发样本扩散。比如，在核酸电泳中，若样本溶液中盐离子浓度过高，导致样本黏度过低，上样后核酸分子容易扩散。

3. 样本中存在杂质：样本中若含有杂质，如细胞碎片、核酸（在蛋白质样本中）等，会干扰样本中目标生物大分子的正常迁移。这些杂质可能与目标分子相互作用，改变其迁移速率和路径，从而导致样本扩散。例如，在提取蛋白质时，如果细胞裂解不完全，残留的细胞碎片会在电泳过程中随着蛋白质一起迁移，影响蛋白质条带的形状。

二、上样操作不当

1. 上样量过大：上样量过大是导致样本扩散的常见原因之一。当过多的样本被加入到凝胶孔中时，样本在凝胶孔中过于拥挤，无法形成整齐的条带。多余的样本会溢出凝胶孔，向周围扩散，导致条带变形、模糊。例如，在蛋白质SDS - PAGE电泳中，如果上样量超过凝胶孔的承载能力，蛋白质就会从凝胶孔两侧挤出，在电泳过程中扩散开来。

2. 上样速度和方式不当：上样速度过快，样本溶液会快速冲击凝胶孔底部，容易产生气泡，且可能使样本在凝胶孔中分布不均匀，导致样本扩散。另外，上样方式不正确，如移液器枪头插入凝胶孔过深或过浅，都可能影响样本的正常进入和分布。例如，枪头插入过深，可能会破坏凝胶结构，使样本向周围扩散；插入过浅，样本可能无法完全进入凝胶孔。

三、电泳条件异常

1. 电泳起始电压过高：在电泳开始时，如果电压过高，样本分子会在短时间内受到较大的电场力作用，快速向阳极或阴极迁移。由于样本分子在凝胶孔中的初始分布并不完全均匀，过高的电压会加剧这种不均匀性，导致样本扩散严重。例如，在开始蛋白质电泳时，若直接将电压设置为较高值，蛋白质分子会迅速冲出凝胶孔，向周围扩散。

2. 电泳过程中温度过高：电泳过程中产生的热量会使凝胶温度升高，而温度升高会导致凝胶的黏度降低，样本分子的热运动加剧。在这种情况下，样本分子更容易在凝胶中扩散，影响条带的清晰度和分离效果。例如，在长时间的核酸电泳中，如果散热不佳，凝胶温度升高，核酸分子会因热运动而扩散。

四、样本扩散对实验的影响

1. 条带模糊：样本扩散严重会使原本应该清晰的电泳条带变得模糊不清，难以准确判断条带的位置和宽度。这对于分析样本中生物大分子的分子量和含量等信息造成了极大的困难。例如，在蛋白质电泳中，模糊的条带无法准确测量蛋白质的分子量，影响后续的数据分析。
2. 条带重叠：扩散的样本可能会使相邻的条带发生重叠，导致无法区分不同的生物大分子。这在复杂样本的分析中尤为严重，会使实验结果失去意义。比如，在分析混合蛋白质样本时，条带重叠会掩盖蛋白质的种类和含量差异。

五、干扰实验结果的准确性

1. 定量分析误差：对于需要进行定量分析的实验，样本扩散会导致条带的光密度测量不准确，从而使定量结果出现较大误差。例如，在通过凝胶成像系统对蛋白质条带进行定量分析时，扩散的条带会使测量的光密度值偏高或偏低，无法真实反映蛋白质的含量。

2. 定性分析错误：样本扩散还可能导致定性分析出现错误。由于条带的形状和位置发生改变，可能会误判生物大分子的种类和特性。例如，将原本不同的蛋白质条带误认为是同一种蛋白质，从而得出错误的实验结论。

六、调整电泳参数

1. 降低电压：如果是因为电泳起始电压过高导致样本扩散，可以在发现扩散后，立即降低电压。较低的电压可以使样本分子的迁移速度减慢，减少扩散的程度。同时，适当延长电泳时间，让样本有足够的时间在凝胶中迁移到合适的位置。

2. 控制温度：对于因温度过高导致的样本扩散，可以采取措施降低凝胶的温度。使用带有冷却装置的电泳槽，如循环水冷式电泳槽，将电泳温度控制在合适的范围内（一般15 - 25℃）。在没有冷却装置的情况下，可以将电泳槽放置在低温环境中，如冰箱冷藏室或带有制冷功能的恒温箱中，但要注意避免冷凝水对电泳仪造成损坏。

七、重新处理样本

1. 浓缩样本：如果样本浓度过低导致扩散，可以尝试对样本进行浓缩。使用超滤离心管等工具，将样本中的水分和小分子杂质去除，提高样本的浓度。浓缩后的样本在凝胶孔中能够更加紧密地聚集，减少扩散的可能性。

2. 去除杂质：对于样本中存在杂质导致的扩散，可以通过离心、过滤等方法去除杂质。例如，在蛋白质样本中，通过高速离心去除细胞碎片；在核酸样本中，使用核酸酶去除残留的核酸。

八、重新上样

1. 调整上样量和方式：重新评估合适的上样量，通过预实验确定最佳的上样体积。同时，改进上样方式，控制上样速度，确保移液器枪头插入凝胶孔的深度合适。缓慢、匀速地上样，避免样本冲击凝胶孔底部，减少气泡的产生，使样本在凝胶孔中均匀分布。

九、预防样本扩散的措施

1. 准确测定样本浓度：在样本处理过程中，使用可靠的方法准确测定样本浓度，如使用分光光度计测定蛋白质或核酸的浓度。根据测定结果，调整样本的浓度至合适范围。

2. 调整样本黏度：根据样本的性质，调整样本的黏度。对于黏度过低的样本，可以加入适量的蔗糖、甘油等增稠剂；对于黏度过高的样本，可适当稀释样本，或者加入适量的去垢剂（如SDS）降低样本黏度，但要注意去垢剂的加入可能会影响样本的性质，需通过预实验确定合适的添加量。

十、规范上样操作

1. 控制上样量：通过预实验确定合适的上样量，避免上样量过大。在实际操作中，使用高精度的移液器准确吸取样本，确保每次上样量的一致性。

2. 掌握正确的上样速度和方式：上样时，将移液器枪头垂直缓慢插入凝胶孔中，插入深度以刚刚接触到凝胶孔底部为宜，然后缓慢推动移液器推杆，将样本注入凝胶孔。注入完成后，缓慢取出枪头，避免带出样本或产生气泡。同时，在每次上样前，检查移液器的性能，确保其正常工作。

十一、合理设置电泳条件

1. 优化电压设置：在电泳开始前，根据样本的性质、凝胶的类型以及实验要求，通过预实验确定合适的电泳电压。一般采用先低电压预电泳，再逐渐升高电压至正常电泳所需电压值的方法，使样本在凝胶中均匀分布，减少扩散现象。

2. 控制电泳温度：使用带有冷却装置的电泳槽，确保电泳过程中凝胶的温度稳定在合适的范围内。在电泳过程中，密切关注温度变化，及时调整冷却装置的参数，保证温度不会过高导致样本扩散。

当DYCZ - 24K双板垂直电泳仪样本上样后扩散严重时，虽然实验面临挑战，但通过分析原因并采取有效的挽救措施，实验还是有可能得到挽救并获得准确结果的。在日常实验中，注重样本处理、上样操作和电泳条件的优化，可以有效预防样本扩散问题的发生，确保实验的顺利进行。

本文由北京六一生物编辑整理。

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