DYCZ - MINI 2型电泳仪上样后样品漂移如何处理？

作者：六一生物发布时间：2025-03-06 09:09:51 点击：

在分子生物学实验领域，DYCZ - MINI 2型电泳仪常用于分离和分析生物大分子，如DNA、RNA和蛋白质等。然而，上样后样品漂移这一现象却常让实验人员头疼不已，它严重干扰实验结果的准确性，影响对生物大分子特性的判断。接下来，我们就深入探讨DYCZ - MINI 2型电泳仪这一问题的成因及解决办法。

一、样品漂移对实验的影响

样品漂移会给实验带来诸多不良后果。首先，它会导致条带变形，使原本清晰、整齐的条带变得扭曲、模糊。在蛋白质电泳实验中，这可能致使对蛋白质分子量和纯度的误判，影响对蛋白质结构与功能的研究。例如，在研究某种酶的特性时，若因样品漂移导致条带判断失误，可能会得出错误的酶分子大小结论，进而影响对其催化机制的研究方向。

其次，样品漂移会造成泳道间的交叉污染。漂移的样品可能从原本的泳道扩散到相邻泳道，使不同样品的条带相互混合，无法准确分辨每个样品的信息。在基因分型实验中，这种交叉污染可能导致基因型判断错误，影响对遗传信息的准确解读，对后续的遗传分析和研究产生误导。

此外，样品漂移还可能导致实验结果缺乏重复性。同样的实验条件下，由于样品漂移的不确定性，每次得到的条带位置和形态可能不一致，使得实验数据无法可靠地用于科学研究，大大降低了实验的可信度。

二、上样后样品漂移的原因及处理方法

1. 样品浓度过低

- 原因：当样品浓度过低时，其粘性不足，在加样孔内难以稳定存在。在缓冲液的浮力和表面张力作用下，样品容易发生漂移。例如，在提取DNA或蛋白质后，由于过度稀释，使得样品浓度远低于正常范围，就容易出现这种情况。
- 处理方法：重新测定样品浓度。可使用分光光度计、酶标仪等仪器准确测量样品的浓度。若浓度过低，采用合适的方法进行浓缩。对于DNA样品，可通过乙醇沉淀法进行浓缩，在低温条件下，利用乙醇使DNA沉淀，再通过离心收集沉淀，最后用适量的缓冲液溶解，提高DNA浓度。对于蛋白质样品，可选用超滤离心管，利用离心力使蛋白质溶液中的小分子杂质和水分通过滤膜，从而达到浓缩蛋白质的目的。

2. 样品中存在杂质

- 原因：样品中若含有杂质，如核酸、多糖、盐离子等，这些杂质可能会干扰样品的迁移行为，导致样品漂移。例如，在蛋白质样品中混有较多的核酸，核酸与蛋白质结合形成复合物，改变了蛋白质的电荷和分子大小，使其在电场中的迁移路径发生变化，从而出现漂移现象。
- 处理方法：对样品进行纯化处理。可采用多种纯化技术，如对于蛋白质样品，可通过凝胶过滤层析，利用不同分子大小的物质在凝胶颗粒孔隙中的扩散速度不同，将蛋白质与杂质分离。也可使用离子交换层析，根据蛋白质和杂质所带电荷的差异进行分离。对于DNA样品，可使用柱层析法，通过特定的柱子吸附DNA，去除杂质。

三、上样操作不当

1. 加样量过多

- 原因：加样量超过了加样孔的承载能力，样品在孔内过于拥挤，部分样品就会溢出并发生漂移。这可能是由于移液器使用不熟练，读数不准确，或者对加样孔的容量判断失误等原因造成的。比如，加样孔的最大容量为10μL，若误加入了15μL的样品，必然会出现样品溢出和漂移的情况。
- 处理方法：准确控制加样量。使用经过校准的移液器，并在每次使用前仔细检查移液器的量程和读数。在加样时，缓慢推动移液器活塞，将样品准确加入到加样孔中。可以先进行少量多次的加样练习，熟练掌握加样技巧，确保加样量准确无误。同时，要清楚了解加样孔的容量，避免加样过多。

2. 加样速度过快

- 原因：加样速度过快，样品会以较大的冲击力进入加样孔，将加样孔内的空气快速挤出，形成气泡，同时也容易导致样品在孔内扩散并漂移。特别是在使用微量移液器时，若按压活塞速度过猛，就容易出现这种情况。
- 处理方法：放慢加样速度。将移液器枪头垂直缓慢地插入加样孔底部，然后轻轻、匀速地推动活塞，使样品缓慢进入加样孔。在加样过程中，要注意观察加样孔内样品的上升情况，避免样品溢出和产生气泡。若发现有气泡产生，可将移液器枪头稍微提起，让气泡逸出后再继续加样。

四、电泳条件问题

1. 电压过高

- 原因：过高的电压会使样品在凝胶中迁移速度过快，分子之间的相互作用和与凝胶的摩擦力不平衡，导致样品漂移。此外，电压过高还会产生过多的热量，使凝胶局部温度升高，进一步影响样品的迁移行为。例如，在进行蛋白质SDS - PAGE电泳时，若电压超过200V，样品条带可能会出现明显的漂移现象。
- 处理方法：根据凝胶的类型、厚度和样品的性质，合理设置电压。一般来说，对于聚丙烯酰胺凝胶，初始电压可设置在80 - 100V，待样品进入分离胶后，将电压提高到120 - 150V。在电泳过程中，密切关注凝胶的温度，可使用循环冷却水或冰浴来降低温度，保持凝胶温度在适宜范围内（一般为15 - 25℃）。

2. 电泳时间过长

- 原因：电泳时间过长，样品在凝胶中过度迁移，条带会逐渐扩散、漂移。而且长时间的电泳会使凝胶中的缓冲液离子浓度发生变化，影响电场的稳定性，也会导致样品漂移。例如，在核酸电泳实验中，如果电泳时间超过3小时，条带可能会出现严重的漂移现象。
- 处理方法：通过预实验确定合适的电泳时间。可以在不同的时间点观察条带的迁移情况，选择条带分离清晰且未出现明显漂移和扩散的时间作为最佳电泳时间。一般来说，蛋白质SDS - PAGE电泳时间在1 - 2小时，核酸电泳时间在0.5 - 2小时之间，具体时间根据实验情况调整。

五、仪器相关问题

1. 加样孔损坏

- 原因：加样孔在长期使用过程中，可能会受到外力撞击、化学腐蚀等，导致其形状变形、孔径变大或出现裂缝。损坏的加样孔无法有效容纳样品，从而导致样品漂移。例如，在清洗凝胶板时，如果不小心用硬物刮擦加样孔，就可能造成加样孔损坏。
- 处理方法：仔细检查加样孔的状态。若发现加样孔有损坏，对于轻微变形或裂缝较小的加样孔，可以尝试使用密封胶进行修补。但如果加样孔损坏严重，如孔径明显变大或出现较大裂缝，建议更换新的凝胶板。在日常使用中，要注意保护加样孔，避免受到外力损伤。
2. 电极不平衡

- 原因：电泳仪的电极如果安装不平整或受到污染，会导致电场分布不均匀，样品在凝胶中受到的电场力不一致，从而使样品漂移。例如，电极表面有污垢或氧化层，会影响电流的传导，造成电场局部减弱或增强。
- 处理方法：定期清洁电极，去除表面的污垢和氧化层。可使用稀酸或稀碱溶液浸泡电极，然后用蒸馏水冲洗干净。在安装电极时，确保电极平行且垂直于凝胶平面，检查电极与电泳仪的连接是否牢固。如果发现电极不平衡，应及时调整或更换电极。

DYCZ - MINI 2型电泳仪上样后样品漂移是由多种因素共同作用导致的。在实验过程中，要从样品制备、上样操作、电泳条件设置以及仪器维护等多个环节进行严格把控。通过仔细排查每个环节，找到样品漂移的根源，并采取相应的解决措施，才能获得准确、可靠的实验结果。

本文由北京六一生物编辑整理。

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