DYCP-32C型琼脂糖水平电泳仪操作指南：从制胶到成像完整步骤

作者：六一生物发布时间：2025-12-17 09:27:30 点击：

DYCP-32C是北京六一推出的大号高通量琼脂糖电泳仪，适配大批量DNA/RNA样本的分离、鉴定与制备，操作核心在于精准控制凝胶浓度、电泳参数和样品处理，以下是从制胶到成像的全流程实操步骤。

一、实验前期准备

1. 仪器与耗材检查

- 检查DYCP-32C电泳槽主体，确认胶室托盘无裂纹、电极无氧化生锈、缓冲液槽无渗漏，槽盖与电极接线接触良好。
- 搭配适配电源，推荐使用DYY-6C或DYY-12C型多用电泳电源，确认电源线连接牢固，电压调节功能正常。
- 准备耗材：琼脂糖粉末、1×TAE或1×TBE缓冲液、核酸染料（如GelRed）、点样梳（可根据需求选25齿等规格）、移液器及吸头、核酸样品、6×Loading Buffer、凝胶成像系统。

2. 缓冲液与样品预处理

- 配制足量1×工作缓冲液：DYCP-32C槽体容量大，单次需准备1000–1200mL，保证后续电泳时液面没过凝胶表面2–3mm。
- 样品处理：将核酸样品与6×Loading Buffer按5:1比例混合，涡旋振荡10秒后短暂离心，使样品充分混匀并沉降至管底。若样品浓度过高，用TE缓冲液稀释至30–50ng/μL，避免上样后条带拖尾。

二、凝胶制备（适配DYCP-32C大号胶室）

1. 确定琼脂糖浓度

根据待分离核酸片段大小选择浓度，这是保证分离效果的关键：

- 大片段DNA（＞10kb）：选用0.8%琼脂糖，降低迁移阻力，避免条带滞留。
- 中片段DNA（1–10kb）：选用1.0%–1.2%琼脂糖，兼顾分离效率与分辨率。
- 小片段DNA（＜1kb）：选用1.5%–2.0%琼脂糖，增强分子筛效应，避免小片段扩散。

2. 熔胶与灌胶操作

- 称取对应质量的琼脂糖粉末，加入锥形瓶中，倒入适量1×缓冲液，轻轻摇匀。

- 微波炉中高火加热30秒，取出摇匀后再加热20秒，重复操作至琼脂糖完全溶解，溶液呈透明无颗粒状态，注意避免暴沸溢出。
- 待溶液冷却至50–60℃（手感温热不烫手），加入核酸染料，按说明书比例（如GelRed按1:10000）轻轻颠倒混匀，避免产生气泡。
- 将DYCP-32C的胶室托盘放置平稳，放入选好的点样梳，确保梳齿距离托盘底部0.5–1mm。沿托盘边缘缓慢倒入凝胶溶液，厚度控制在3–4mm，室温静置25–30分钟，直至凝胶完全凝固（呈乳白色不透明状）。

三、上样与电泳操作

1. 胶板放置与缓冲液添加

- 凝胶凝固后，捏住梳子两端垂直轻轻拔出，避免撕裂加样孔。
- 将胶板平稳放入DYCP-32C电泳槽内，确保加样孔一侧靠近电泳槽负极（黑色接线端），核酸带负电会向正极迁移。
- 向电泳槽中缓慢倒入1×缓冲液，直至液面没过凝胶表面2–3mm，避免缓冲液过少导致凝胶边缘电阻不均。

2. 样品上样

- 用移液器吸取预处理好的样品，斜角45°对准加样孔中心，缓慢匀速推液，使样品沉入孔底。
- DYCP-32C支持高通量上样，按从左到右的顺序依次加样，每孔上样量建议10–15μL，避免过量导致样品溢出污染相邻孔。
- 可在边缘孔加入DNA Marker，用于后续片段分子量比对。

3. 电泳参数设置

- 盖好电泳槽盖子，正确连接电极线：负极接加样孔侧，正极接另一侧。
- 开启电源，选择恒压模式，设置电压为50–70V，电压过高会导致凝胶发热，造成条带模糊。
- 电泳时间根据片段大小调整，通常40–60分钟，待指示剂（溴酚蓝）迁移至凝胶2/3处时，即可停止电泳。

四、染色与成像

1. 染色处理

- 内染法：若制胶时已加入染料，电泳后可直接成像，无需额外染色。
- 后染法：若未内染，将凝胶小心取出，放入染色液中浸泡15–20分钟，再用清水漂洗5分钟，去除多余染料，降低背景荧光。

2. 凝胶成像

- 打开凝胶成像系统，调整紫外灯波长至合适范围（通常254nm或302nm）。
- 将凝胶放置在成像台上，关闭暗箱门，调整焦距和曝光时间，直至条带清晰可见，背景无明显杂光。
- 拍摄并保存图像，记录条带的位置、数量和亮度，用于后续分子量分析或定量检测。

五、实验后仪器清洁与维护

1. 电泳结束后，先关闭电源，再拆除电极线，倒出槽内剩余缓冲液，禁止反复使用旧缓冲液。
2. 用蒸馏水冲洗电泳槽、胶室托盘和梳子，去除残留凝胶和缓冲液结晶，琼脂糖残留可用温水浸泡后擦拭。
3. 将配件晾干后存放，仪器主体加盖防尘罩，置于干燥通风环境，避免潮湿腐蚀电极。
4. 定期检查电极状态，若出现氧化生锈，用400目砂纸轻轻打磨，确保后续电场均匀稳定。

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本文由北京六一生物编辑整理。

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