如何用DYCP-32C型电泳仪进行DNA琼脂糖凝胶电泳？

作者：六一生物发布时间：2025-12-17 09:28:29 点击：

DYCP - 32C作为北京六一的琼脂糖水平电泳仪，适合DNA样本的分离检测，用它做DNA琼脂糖凝胶电泳，可按制胶、样品处理、电泳、染色成像及仪器维护的流程操作，具体步骤如下：

1. 前期准备

1. 仪器与耗材筹备：检查DYCP - 32C电泳槽，确保胶室无破损、电极无氧化，搭配适配的DYY系列电源。准备琼脂糖粉末、1×TAE或1×TBE缓冲液、低毒核酸染料（如GelRed）、对应规格点样梳、移液器及吸头、DNA样品、6×Loading Buffer和DNA Marker。
2. 样品预处理：按DNA样品与6×Loading Buffer 5:1的比例混合，涡旋振荡后短暂离心，让样品充分混匀并沉降。若样品含蛋白、多糖等杂质，需先通过柱纯化处理；若为易形成二级结构的GC富集片段，可65℃加热5分钟后冰浴冷却。

2. 琼脂糖凝胶制备

1. 配制凝胶液：依据DNA片段大小确定琼脂糖浓度。比如分离200bp - 10kb片段可配1.0%凝胶，称取对应质量的琼脂糖放入锥形瓶，加入适量1×缓冲液（如制大胶可加100mL），微波炉中高火加热至完全溶解，期间摇匀2 - 3次避免局部结块。
2. 加染料与灌胶：待凝胶液冷却至50 - 60℃，按1:10000比例加入核酸染料并轻轻混匀。将DYCP - 32C的胶室托盘放平稳，插入点样梳，沿托盘边缘缓慢倒入凝胶液，厚度控制在3 - 4mm，避免产生气泡，室温静置30分钟直至凝胶完全凝固。

3. 上样与电泳运行

1. 放置凝胶与加缓冲液：凝胶凝固后垂直轻拔点样梳，将胶板平稳放入电泳槽，确保加样孔侧靠近负极。向槽内倒入1×缓冲液，液面需没过凝胶表面2 - 3mm，保障电场均匀。
2. 样品上样：用移液器吸取10 - 15μL预处理后的样品，斜角对准加样孔缓慢推液，防止样品溢出。同时在边缘孔加入DNA Marker，用于后续分子量比对。
3. 设定参数电泳：盖好电泳槽盖，正确连接电极线。开启电源选恒压模式，设置电压50 - 70V，避免电压过高导致凝胶发热。电泳时间通常40 - 60分钟，待指示剂溴酚蓝迁移至凝胶2/3处时停止电泳。

4. 染色与成像

1. 染色处理：若制胶时已加染料（内染法），电泳后可直接成像；若未内染，将凝胶取出放入染色液中浸泡15 - 20分钟，之后用清水漂洗5分钟去除多余染料，降低背景荧光。
2. 观察成像：把凝胶放到凝胶成像系统的暗箱内，调整紫外灯波长（常用254nm或302nm），调节焦距和曝光时间，待条带清晰后拍摄并保存图像，用于后续DNA片段的分析与记录。

5. 仪器清洁维护：电泳结束后先关闭电源，倒出剩余缓冲液，用蒸馏水冲洗电泳槽、托盘和梳子，去除残留凝胶和缓冲液结晶。晾干所有配件后，将仪器置于干燥通风处存放，若电极有氧化痕迹，可用400目砂纸轻轻打磨。

本文由北京六一生物编辑整理。

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