新手必知电泳仪的正确使用步骤

作者：六一生物发布时间：2024-07-24 09:00:36 点击：

对于刚刚接触电泳实验的新手来说，掌握电泳仪的正确使用步骤是确保实验成功的关键。下面将为您详细介绍电泳仪的正确使用流程，帮助您顺利开展实验。

一、准备工作

在开始使用电泳仪之前，充分的准备工作必不可少。

首先，您需要熟悉实验的目的和要求，确定所需的电泳类型（如琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等）以及样品的性质和浓度。

然后，准备好所需的仪器和试剂，包括电泳仪、电泳槽、电源、凝胶、缓冲液、样品、移液器、染色剂等。同时，确保工作环境整洁、干燥，避免灰尘和杂质对实验的干扰。

二、安装电泳槽

将电泳槽的两个电极分别插入对应的插孔中，确保连接紧密且稳定。如果是可拆卸的电泳槽，按照说明书正确组装各个部件。

对于水平电泳槽，要将凝胶放置在槽内，并确保凝胶与电泳槽的边缘紧密贴合，没有缝隙。垂直电泳槽则需要将凝胶安装在夹板之间，并注意调整夹板的位置，使凝胶保持垂直状态。

三、配制缓冲液

根据实验的类型和要求，选择合适的缓冲液配方。按照配方准确称量所需的试剂，溶解在适量的蒸馏水中。

配制过程中要充分搅拌，使试剂完全溶解。调整缓冲液的 pH 值至规定范围，并用 pH 计进行测量和校准。

四、制备凝胶

如果使用琼脂糖凝胶，根据样品的大小和分离要求，确定琼脂糖的浓度。将琼脂糖粉末加入到已加热的缓冲液中，搅拌至完全溶解。

然后将溶液倒入模具中，插入梳子，待凝胶冷却凝固后拔出梳子，形成加样孔。

对于聚丙烯酰胺凝胶，需要按照一定的比例混合丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺溶液，并加入引发剂和催化剂，迅速灌胶，使其聚合凝固。

五、加样

使用移液器将处理好的样品缓慢加入到凝胶的加样孔中。加样时要注意避免产生气泡，且加样量不宜过多或过少。

通常，每个加样孔的加样量应控制在一定的体积范围内，以保证电泳效果。

六、连接电泳仪

将电泳槽与电泳仪的电源连接好，注意正负极的对应关系。确保连接牢固，避免接触不良导致电流不稳定。

七、设置电泳参数

根据实验的要求和样品的特性，设置合适的电泳参数，如电压、电流和电泳时间。

一般来说，起始电压不宜过高，以免造成样品的快速迁移和条带变形。随着电泳的进行，可以适当提高电压，但要密切观察电泳的情况，防止过热或其他异常现象。

电泳时间的确定需要根据凝胶的长度、浓度以及样品的迁移速度进行估算。可以通过预实验或者参考相关文献来初步确定电泳时间，然后在实际操作中根据条带的迁移情况进行调整。

八、启动电泳

确认所有设置无误后，启动电泳仪，开始电泳实验。

在电泳过程中，要定期观察凝胶中样品的迁移情况，如条带的清晰度、位置和形状等。如果发现异常，应及时停止电泳，检查原因并进行相应的调整。

九、结束电泳

当样品中的条带迁移到合适的位置时，停止电泳。关闭电源，小心取出电泳槽。

十、染色与观察

对电泳后的凝胶进行染色处理，以显示样品的条带。常用的染色剂有 EB（溴化乙锭）、考马斯亮蓝等。

染色完成后，使用凝胶成像系统或紫外透射仪对凝胶进行观察和拍照，记录实验结果。

十一、清洁与整理

实验结束后，及时清理电泳槽、电极和其他仪器设备，去除残留的凝胶和缓冲液。将仪器整理归位，妥善存放试剂和样品。

通过以上详细的步骤，新手可以逐步掌握电泳仪的正确使用方法。需要注意的是，在实际操作中要严格遵守实验室的安全规范，认真细致地进行每一个环节，多进行练习和总结经验，不断提高自己的实验技能。

本文由北京六一生物编辑整理。

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