DYCZ-30C 型双板夹芯式垂直电泳仪的操作手册

作者：六一生物发布时间：2024-09-18 09:29:53 点击：

在生物化学和分子生物学领域中，电泳技术是极为关键的实验手段，而 DYCZ - 30C 型双板夹芯式垂直电泳仪是一款常用的实验仪器。以下是一份详细DYCZ - 30C 型双板夹芯式垂直电泳仪的操作手册，帮助你熟练掌握该仪器的使用。

一、DYCZ - 30C 型双板夹芯式垂直电泳仪的基本结构

1. 电泳槽

- 电泳槽是整个电泳过程的核心容器，它由两个平行的电极室和中间的凝胶室组成。电极室用于容纳电极和缓冲液，凝胶室则用于放置凝胶和样品。
- 电泳槽通常由透明的塑料或玻璃材料制成，以便于观察电泳过程。其底部和侧面设计有卡槽，用于固定凝胶板。

2. 电极

- 包括正极和负极，通常是由金属（如铂）制成的电极片。正极和负极分别位于电泳槽的两端，通过外接电源提供电场。
- 电极的质量和稳定性对电泳效果至关重要，确保电极表面清洁，无腐蚀和氧化现象。

3. 制胶板组件

- 由两块玻璃板和夹芯组成。玻璃板的质量直接影响凝胶的质量，需要保持清洁、平整，无划痕和污渍。
- 夹芯用于固定玻璃板之间的距离，从而控制凝胶的厚度。在制胶前，需要确保夹芯与玻璃板紧密贴合，无间隙。

二、实验前的准备工作

1. 样品准备

- 蛋白质样品

- 从细胞或组织中提取蛋白质，可使用适当的裂解液（如 RIPA 裂解液），并通过离心去除杂质。
- 对提取的蛋白质进行定量，可以采用 BCA 法或 Bradford 法等。根据定量结果，将蛋白质样品与上样缓冲液按一定比例混合，然后在沸水中煮 5 - 10 分钟进行变性处理。

- 核酸样品

- 从血液、细胞或组织中提取 DNA 或 RNA，可使用商品化的提取试剂盒。提取后的核酸需要通过分光光度计检测纯度和浓度。
- 根据实验需求，将核酸样品稀释或浓缩至合适的浓度，并与上样缓冲液混合。

2. 凝胶制备

- 聚丙烯酰胺凝胶制备

- 根据实验目的选择合适的丙烯酰胺浓度。一般来说，分离小分子蛋白质可选择较高浓度（如 15% - 20%），分离大分子蛋白质可选择较低浓度（如 7% - 10%）。
- 准备好丙烯酰胺、双丙烯酰胺、TEMED（四甲基乙二胺）、过硫酸铵等试剂。按照一定比例将丙烯酰胺和双丙烯酰胺溶解在水中，然后加入 TEMED 和过硫酸铵，迅速搅拌均匀后倒入制胶板中。在倒胶过程中，要避免产生气泡，可轻轻敲打玻璃板或使用注射器排出气泡。

- 琼脂糖凝胶制备

- 根据要分离的核酸片段大小选择合适浓度的琼脂糖。例如，分离小片段核酸可选择 2% - 3%的琼脂糖，分离大片段核酸可选择 0.8% - 1.2%的琼脂糖。
- 将琼脂糖加入到适量的缓冲液（如 TAE 或 TBE 缓冲液）中，在微波炉中加热至琼脂糖完全溶解。然后将溶液冷却至 50 - 60°C 左右，倒入制胶模具中，并插入梳子，待凝胶凝固后拔出梳子形成加样孔。

3. 缓冲液配置

- 蛋白质电泳缓冲液：常用的是 Tris - 甘氨酸缓冲液（pH 8.3）。准确称量 Tris 和甘氨酸，加入适量的 SDS 和水，搅拌均匀后调节 pH 值至 8.3。
- 核酸电泳缓冲液：常用的有 TAE（Tris - 乙酸 - EDTA）缓冲液和 TBE（Tris - 硼酸 - EDTA）缓冲液。按照配方准确称量相应的试剂，加入水搅拌均匀即可。

三、DYCZ - 30C 型双板夹芯式垂直电泳仪的操作步骤

1. 安装凝胶

- 将制备好的凝胶（聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶）从制胶模具中取出，小心地放入电泳槽中。确保凝胶与电泳槽的底部和侧面紧密贴合，没有气泡。对于聚丙烯酰胺凝胶，要注意凝胶的正反面，通常有光泽的一面朝上。

2. 加入缓冲液

- 根据实验类型（蛋白质电泳或核酸电泳），缓慢地将相应的缓冲液倒入电泳槽中。确保缓冲液没过凝胶，对于蛋白质电泳，缓冲液的液面要高于凝胶上表面 2 - 3mm；对于核酸电泳，缓冲液的液面要高于凝胶 1 - 2mm。

3. 上样

- 使用微量移液器将处理好的样品（蛋白质样品或核酸样品）缓慢地加入到凝胶的加样孔中。注意不要将样品溢出加样孔，也不要刺破凝胶。上样的体积根据加样孔的大小和样品浓度来确定，一般蛋白质样品上样体积为 10 - 30μL，核酸样品上样体积为 5 - 10μL。

4. 连接电源

- 将电泳槽的电极与电源的相应接口连接起来。注意正负极不要接反，通常红色接口为正极，黑色接口为负极。

5. 设置参数

- 打开电源开关，根据实验要求设置电泳参数。
- 蛋白质电泳：一般先设置较低的电压（如 50 - 80V）进行预电泳，待样品进入凝胶后再调整到较高的电压（如 100 - 150V）。
- 核酸电泳：根据凝胶的长度和核酸片段的大小设置合适的电压（如 5 - 10V/cm）。

6. 开始电泳
- 确认参数设置无误后，点击开始按钮，开始电泳。在电泳过程中，要注意观察电泳槽内的情况，如有异常（如产生大量气泡、电流不稳定等）应及时停止电泳，检查原因。

四、实验后的处理与数据分析

1. 凝胶处理

- 蛋白质凝胶处理

- 电泳结束后，如果需要进行后续的染色和分析（如考马斯亮蓝染色或者 Western Blot 分析），可按照相应的方法进行操作。
- 考马斯亮蓝染色时，将凝胶浸泡在考马斯亮蓝染色液中，在摇床上振荡 1 - 2 小时，然后用脱色液进行脱色，直到背景清晰，蛋白质条带显现出来。

- 核酸凝胶处理

- 核酸凝胶电泳结束后，可使用核酸染色剂（如 EB、SYBR Green 等）进行染色。EB 是一种常用的核酸染色剂，但由于其具有一定的毒性，现在更多地使用 SYBR Green 等相对安全的染色剂。
- 染色后的核酸凝胶可以在紫外灯下观察和拍照，根据核酸条带的位置和亮度来分析核酸的大小和浓度。

2. 数据分析

- 蛋白质电泳数据分析

- 通过比较不同样品在凝胶上的条带位置和强度，可以分析蛋白质的分子量和表达水平。
- 已知标准蛋白质的分子量和迁移率，可以绘制标准曲线，然后根据未知蛋白质的迁移率在标准曲线上查找其分子量。同时，通过比较不同处理组中蛋白质条带的强度，可以了解蛋白质表达水平的变化。

- 核酸电泳数据分析

- 根据核酸条带在凝胶中的位置，可以判断核酸片段的大小。较小的核酸片段在电场中迁移速度较快，会出现在凝胶的底部；较大的核酸片段迁移速度较慢，会出现在凝胶的上部。
- 通过比较不同样品中核酸条带的亮度，可以了解核酸浓度的变化。

五、注意事项

1. 安全方面

- 在使用电源时，要确保电源插头插紧，避免触电事故。同时，不要在潮湿的环境中使用电泳仪，以免发生漏电。
- 在处理化学试剂（如丙烯酰胺、EB 等）时，要严格按照操作规范进行，佩戴好防护手套、口罩等防护用品，避免接触皮肤和吸入有毒气体。

2. 操作方面

- 在安装凝胶和上样时，要小心操作，避免损坏凝胶和加样孔。
- 在设置电泳参数时，要根据实验要求和样品的性质合理设置，不要随意更改参数，以免影响实验结果。
- 在电泳过程中，要保持电泳槽周围环境的稳定，避免震动和温度变化过大，影响电泳效果。

通过以上详细的操作手册，相信你能够熟练地使用 DYCZ - 30C 型双板夹芯式垂直电泳仪进行实验。在实际操作过程中，要不断积累经验，根据实验需求进行灵活调整，以获得更准确、可靠的实验结果。

本文由北京六一生物编辑整理。

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