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行业知识
DYCZ-28B 型垂直电泳仪详细操作步骤全解析
作者:六一生物
发布时间:2024-09-19 08:47:27
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在生物实验的领域中,电泳技术是一种至关重要的分离和分析手段,而 DYCZ - 28B 型垂直电泳仪以其高效稳定的性能被广泛应用。下面就为大家详细介绍这款DYCZ - 28B 型垂直电泳仪的操作步骤,让你能在实验中得心应手。
一、前期准备工作
1. 设备检查
- 从储存位置取出 DYCZ - 28B 型垂直电泳仪,仔细检查电泳槽、电极、玻璃板、梳子等部件是否有损坏或者缺失的情况。任何有瑕疵的部件都可能影响后续实验的进行。
- 检查电源线是否完好,确保没有破损或者短路的风险。
2. 实验材料准备
- 根据实验目的选择合适的凝胶类型,如聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶。对于蛋白质的分离,聚丙烯酰胺凝胶通常是首选;对于核酸的分离,琼脂糖凝胶更为常用。
- 准备相应的缓冲液,常见的缓冲液有 Tris - 乙酸(TAE)、Tris - 硼酸(TBE)等。按照标准配方准确称量化学试剂,用去离子水溶解并定容,确保缓冲液的浓度准确无误。
- 收集并处理实验样本,例如对蛋白质样本进行提取、纯化、变性等操作,对核酸样本进行提取、酶切等处理。
二、玻璃板的清洗与安装
1. 清洗玻璃板
- 将玻璃板从电泳仪中取出,用温和的洗涤剂和温水清洗玻璃板表面的灰尘、油脂等杂质。可以使用软布或者海绵轻轻擦拭。
- 用大量的清水冲洗玻璃板,确保洗涤剂完全被冲洗掉。
- 最后,用无水乙醇擦拭玻璃板,使其表面干燥且清洁,这样可以避免在电泳过程中产生气泡或者影响凝胶的凝固。
2. 安装玻璃板
- 对于单板操作,先将一块玻璃板平放在干净的实验台上,将配套的橡胶条或塑料夹条沿着玻璃板的边缘放置,确保夹条与玻璃板紧密贴合。然后,将另一块玻璃板覆盖在上面,形成夹心结构。
- 对于双板操作,按照同样的方法分别组装好两块玻璃板夹心结构。在安装过程中,要注意避免玻璃板之间产生气泡,确保玻璃板之间的密封性。
三、灌胶过程
1. 凝胶溶液制备
- 根据实验需求确定凝胶的浓度。不同的样本和分离目的需要不同的凝胶浓度。例如,分离小分子蛋白质可能需要较高浓度的聚丙烯酰胺凝胶,而分离大片段核酸则需要较低浓度的琼脂糖凝胶。
- 将所需的凝胶试剂按照比例混合,在搅拌的同时加入适量的催化剂和加速剂,确保凝胶溶液混合均匀。
2. 灌胶
- 将制备好的凝胶溶液缓慢倒入已经安装好的玻璃板之间的空隙中。对于单板,从一端开始缓慢倾倒,让溶液自然流淌,确保没有气泡产生;对于双板,分别对两块玻璃板夹心结构进行灌胶操作。
- 当凝胶溶液灌至距离玻璃板顶部约 1 - 2 厘米时,停止灌胶。
四、梳子的插入与凝胶凝固
1. 插入梳子
- 在凝胶溶液尚未完全凝固之前(通常在灌胶后几分钟内),将梳子轻轻插入凝胶溶液中。梳子的齿要垂直向下,并且确保梳子插入的深度均匀一致。梳子的作用是在凝胶中形成加样孔。
2. 凝胶凝固
- 让凝胶在室温下自然凝固。凝固时间根据凝胶的类型和浓度而有所不同,一般聚丙烯酰胺凝胶需要 30 - 60 分钟,琼脂糖凝胶则需要 15 - 30 分钟左右。
五、样本准备与加样
1. 样本处理
- 根据实验设计对样本进行进一步处理,如对蛋白质样本进行定量、调整缓冲液成分等,对核酸样本进行荧光标记等操作。
2. 加样
- 当凝胶完全凝固后,小心地拔出梳子,此时在凝胶中会留下整齐的加样孔。
- 使用微量移液器,吸取适量的样本,缓慢地将样本加入到加样孔中。注意加样的体积要适中,不要超过加样孔的容量,同时要避免样本溢出到相邻的加样孔中。
六、电泳操作
1. 连接电极
- 将电泳槽的电极与电源连接,红色电极连接电源正极,黑色电极连接电源负极。确保连接牢固,没有松动或者接触不良的情况。
2. 设置参数
- 根据实验要求和样本特性,设置合适的电泳电压和电泳时间。例如,对于蛋白质的 SDS - PAGE 电泳,通常设置电压为 80 - 120V,电泳时间为 1 - 3 小时;对于核酸的琼脂糖凝胶电泳,可设置电压为 100 - 150V,电泳时间为 30 - 60 分钟。
3. 开始电泳
- 打开电源开关,开始电泳。在电泳过程中,注意观察电泳槽内的情况,确保电流稳定,没有异常现象,如电极冒泡异常、凝胶发热等。
七、实验结束后的处理
1. 关闭电源
- 当电泳达到预定的时间后,先关闭电源开关,然后再拔掉电极插头,确保安全。
2. 取出凝胶
- 小心地将玻璃板从电泳槽中取出,用专用的工具将玻璃板分开,取出凝胶。
3. 后续分析
- 根据实验目的对凝胶进行染色、显色、拍照或者其他分析操作,如对蛋白质凝胶进行考马斯亮蓝染色或银染,对核酸凝胶进行溴化乙锭染色等。
八、注意事项
1. 安全注意事项
- 在操作电泳仪的过程中,始终注意安全。避免直接接触电极和电泳液,防止触电事故的发生。
- 电泳过程中可能会产生热量,避免触摸电泳槽以免烫伤。
2. 实验环境
- 保持实验环境的清洁和稳定。避免灰尘、杂质等进入电泳槽,影响实验结果。同时,尽量保持温度和湿度的相对稳定。
3. 操作规范
- 严格按照操作步骤进行操作,不要随意更改实验条件和操作流程。
- 在灌胶、加样等过程中,要尽量避免产生气泡,以免影响实验结果。
DYCZ - 28B 型垂直电泳仪的操作虽然需要一定的细心和耐心,但只要按照上述详细的步骤进行操作,就能在实验中获得理想的分离效果,为你的科研工作提供可靠的实验数据。
本文由北京六一生物编辑整理。
北京六一生物科技有限公司创建于1970年,50多年的历史,公司先后3次承担电泳装置产品国家、行业标准的起草、修订工作,2009年负责《基础电泳装置》国家标准已发布实施。专业生产生物化学与分子生物学检验分析仪器的科技型国有企业。
主要生产包含电泳仪、紫外分析仪、凝胶成像分析系统、酶标仪、化学发光成像系统、基因扩增仪等检验分析设备。
如果您对我们的产品有任何问题,欢迎您的来电:400 960 6117
我们的目标是:做生物化学分析仪器行业海尔
一、前期准备工作
1. 设备检查
- 从储存位置取出 DYCZ - 28B 型垂直电泳仪,仔细检查电泳槽、电极、玻璃板、梳子等部件是否有损坏或者缺失的情况。任何有瑕疵的部件都可能影响后续实验的进行。
- 检查电源线是否完好,确保没有破损或者短路的风险。
2. 实验材料准备
- 根据实验目的选择合适的凝胶类型,如聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶。对于蛋白质的分离,聚丙烯酰胺凝胶通常是首选;对于核酸的分离,琼脂糖凝胶更为常用。
- 准备相应的缓冲液,常见的缓冲液有 Tris - 乙酸(TAE)、Tris - 硼酸(TBE)等。按照标准配方准确称量化学试剂,用去离子水溶解并定容,确保缓冲液的浓度准确无误。
- 收集并处理实验样本,例如对蛋白质样本进行提取、纯化、变性等操作,对核酸样本进行提取、酶切等处理。
二、玻璃板的清洗与安装
1. 清洗玻璃板
- 将玻璃板从电泳仪中取出,用温和的洗涤剂和温水清洗玻璃板表面的灰尘、油脂等杂质。可以使用软布或者海绵轻轻擦拭。
- 用大量的清水冲洗玻璃板,确保洗涤剂完全被冲洗掉。
- 最后,用无水乙醇擦拭玻璃板,使其表面干燥且清洁,这样可以避免在电泳过程中产生气泡或者影响凝胶的凝固。
2. 安装玻璃板
- 对于单板操作,先将一块玻璃板平放在干净的实验台上,将配套的橡胶条或塑料夹条沿着玻璃板的边缘放置,确保夹条与玻璃板紧密贴合。然后,将另一块玻璃板覆盖在上面,形成夹心结构。
- 对于双板操作,按照同样的方法分别组装好两块玻璃板夹心结构。在安装过程中,要注意避免玻璃板之间产生气泡,确保玻璃板之间的密封性。
三、灌胶过程
1. 凝胶溶液制备
- 根据实验需求确定凝胶的浓度。不同的样本和分离目的需要不同的凝胶浓度。例如,分离小分子蛋白质可能需要较高浓度的聚丙烯酰胺凝胶,而分离大片段核酸则需要较低浓度的琼脂糖凝胶。
- 将所需的凝胶试剂按照比例混合,在搅拌的同时加入适量的催化剂和加速剂,确保凝胶溶液混合均匀。
2. 灌胶
- 将制备好的凝胶溶液缓慢倒入已经安装好的玻璃板之间的空隙中。对于单板,从一端开始缓慢倾倒,让溶液自然流淌,确保没有气泡产生;对于双板,分别对两块玻璃板夹心结构进行灌胶操作。
- 当凝胶溶液灌至距离玻璃板顶部约 1 - 2 厘米时,停止灌胶。
四、梳子的插入与凝胶凝固
1. 插入梳子
- 在凝胶溶液尚未完全凝固之前(通常在灌胶后几分钟内),将梳子轻轻插入凝胶溶液中。梳子的齿要垂直向下,并且确保梳子插入的深度均匀一致。梳子的作用是在凝胶中形成加样孔。
2. 凝胶凝固
- 让凝胶在室温下自然凝固。凝固时间根据凝胶的类型和浓度而有所不同,一般聚丙烯酰胺凝胶需要 30 - 60 分钟,琼脂糖凝胶则需要 15 - 30 分钟左右。
五、样本准备与加样
1. 样本处理
- 根据实验设计对样本进行进一步处理,如对蛋白质样本进行定量、调整缓冲液成分等,对核酸样本进行荧光标记等操作。
2. 加样
- 当凝胶完全凝固后,小心地拔出梳子,此时在凝胶中会留下整齐的加样孔。
- 使用微量移液器,吸取适量的样本,缓慢地将样本加入到加样孔中。注意加样的体积要适中,不要超过加样孔的容量,同时要避免样本溢出到相邻的加样孔中。
六、电泳操作
1. 连接电极
- 将电泳槽的电极与电源连接,红色电极连接电源正极,黑色电极连接电源负极。确保连接牢固,没有松动或者接触不良的情况。
2. 设置参数
- 根据实验要求和样本特性,设置合适的电泳电压和电泳时间。例如,对于蛋白质的 SDS - PAGE 电泳,通常设置电压为 80 - 120V,电泳时间为 1 - 3 小时;对于核酸的琼脂糖凝胶电泳,可设置电压为 100 - 150V,电泳时间为 30 - 60 分钟。
3. 开始电泳
- 打开电源开关,开始电泳。在电泳过程中,注意观察电泳槽内的情况,确保电流稳定,没有异常现象,如电极冒泡异常、凝胶发热等。
七、实验结束后的处理
1. 关闭电源
- 当电泳达到预定的时间后,先关闭电源开关,然后再拔掉电极插头,确保安全。
2. 取出凝胶
- 小心地将玻璃板从电泳槽中取出,用专用的工具将玻璃板分开,取出凝胶。
3. 后续分析
- 根据实验目的对凝胶进行染色、显色、拍照或者其他分析操作,如对蛋白质凝胶进行考马斯亮蓝染色或银染,对核酸凝胶进行溴化乙锭染色等。
八、注意事项
1. 安全注意事项
- 在操作电泳仪的过程中,始终注意安全。避免直接接触电极和电泳液,防止触电事故的发生。
- 电泳过程中可能会产生热量,避免触摸电泳槽以免烫伤。
2. 实验环境
- 保持实验环境的清洁和稳定。避免灰尘、杂质等进入电泳槽,影响实验结果。同时,尽量保持温度和湿度的相对稳定。
3. 操作规范
- 严格按照操作步骤进行操作,不要随意更改实验条件和操作流程。
- 在灌胶、加样等过程中,要尽量避免产生气泡,以免影响实验结果。
DYCZ - 28B 型垂直电泳仪的操作虽然需要一定的细心和耐心,但只要按照上述详细的步骤进行操作,就能在实验中获得理想的分离效果,为你的科研工作提供可靠的实验数据。
本文由北京六一生物编辑整理。
北京六一生物科技有限公司创建于1970年,50多年的历史,公司先后3次承担电泳装置产品国家、行业标准的起草、修订工作,2009年负责《基础电泳装置》国家标准已发布实施。专业生产生物化学与分子生物学检验分析仪器的科技型国有企业。
主要生产包含电泳仪、紫外分析仪、凝胶成像分析系统、酶标仪、化学发光成像系统、基因扩增仪等检验分析设备。
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