使用DYCZ - 24KF型四板垂直电泳仪时凝胶不凝固的原因及对策

作者：六一生物发布时间：2025-03-03 09:14:17 点击：

在运用DYCZ - 24KF型四板垂直电泳仪开展生物实验的进程中，凝胶不凝固是一个常令实验人员头疼的问题。凝胶作为生物大分子分离的关键介质，其能否正常凝固直接关乎实验的成败。接下来，我们将全面且深入地探讨DYCZ - 24KF型四板垂直电泳仪凝胶不凝固的原因，并给出行之有效的解决对策。

一、凝胶不凝固对实验的影响

当凝胶无法正常凝固时，整个实验将陷入困境。首先，未凝固的凝胶无法形成稳定的三维网状结构，这意味着在后续电泳过程中，蛋白质、核酸等生物大分子缺乏有效的支撑和筛分环境，无法按照预期的规律迁移，条带混乱无序，根本无法获取准确的实验数据。其次，不凝固的凝胶可能导致样品渗漏，使实验结果完全失去意义，之前投入的大量时间、精力和试剂都付诸东流。此外，频繁遭遇凝胶不凝固问题，会严重影响实验进度，拖延科研项目的推进。

二、凝胶不凝固的原因及解决方法

1. 试剂过期或质量不佳

- 原因：实验试剂都有其特定的保质期，像丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED（四甲基乙二胺）等用于制备凝胶的关键试剂，若超过保质期，其化学活性会大幅降低甚至丧失。例如，过期的过硫酸铵可能无法有效分解产生自由基，从而无法引发丙烯酰胺的聚合反应，导致凝胶不凝固。同时，一些质量不过关的试剂，其纯度和稳定性存在问题，即使在保质期内，也可能影响凝胶的凝固效果。
- 解决方法：仔细检查试剂的生产日期和保质期，对于过期试剂，坚决予以更换。在采购试剂时，选择正规、信誉良好的供应商，确保试剂质量。购买后，按照试剂的储存要求妥善保存，如将丙烯酰胺等避光保存，过硫酸铵等密封防潮保存。

2. 试剂比例失调

- 原因：凝胶的凝固需要各种试剂精确配比。以常见的聚丙烯酰胺凝胶为例，丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例决定了凝胶的交联度和孔径大小，而过硫酸铵和TEMED的用量则影响聚合反应的速率。如果在配制过程中，因称量不准确或移液器操作失误，导致试剂比例失调，就可能引发凝胶不凝固的问题。比如，丙烯酰胺用量过少，无法形成足够的聚合物网络；过硫酸铵和TEMED用量不足，聚合反应难以启动。
- 解决方法：重新仔细核对实验配方，使用高精度的天平准确称量固体试剂，如丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺等。对于液体试剂，如TEMED等，使用经过校准的移液器进行量取，确保试剂比例准确无误。在配制过程中，可多配制几份小样进行预实验，观察凝胶的凝固情况，根据结果微调试剂比例。

三、操作流程问题

1. 混合不均匀

- 原因：在配制凝胶溶液时，若搅拌不充分，各种试剂无法充分混合均匀，会导致局部试剂浓度过高或过低，影响聚合反应的进行。例如，过硫酸铵和TEMED未均匀分散在溶液中，就无法在整个体系中有效引发聚合，使得凝胶部分区域凝固异常或不凝固。
- 解决方法：使用磁力搅拌器或手动搅拌棒，充分搅拌凝胶溶液。搅拌时间应足够长，一般建议磁力搅拌5 - 10分钟，手动搅拌时持续搅拌3 - 5分钟，确保溶液呈现均匀的状态。在搅拌过程中，要注意避免产生过多气泡，若有气泡，可将溶液静置一段时间，待气泡自然逸出后再进行下一步操作。

2. 温度不适宜

- 原因：聚合反应对温度较为敏感。温度过低，反应速率会大幅减缓甚至停滞，导致凝胶长时间不凝固。例如，在寒冷的冬季，实验室未开启空调等取暖设备，环境温度可能低于15℃，这种低温环境不利于过硫酸铵分解产生自由基，进而影响丙烯酰胺的聚合。而温度过高，聚合反应可能过于剧烈，导致凝胶结构不均匀，甚至出现凝胶干裂等问题。
- 解决方法：将实验环境温度控制在适宜范围，一般20 - 25℃较为理想。可以使用空调、恒温箱等设备调节温度。在配制凝胶溶液时，可将试剂提前放置在实验环境中平衡温度，避免因试剂温度与环境温度差异过大而影响反应。对于一些对温度要求苛刻的实验，可使用恒温水浴装置来控制凝胶溶液的温度，确保聚合反应在适宜温度下进行。

四、仪器及其他因素

1. 制胶模具不干净

- 原因：制胶模具若残留有杂质、油污或之前凝胶的残渣，会干扰凝胶的凝固过程。这些杂质可能会与凝胶溶液中的试剂发生反应，阻碍聚合反应的进行，或者破坏凝胶的结构，导致凝胶无法正常凝固。例如，模具上残留的油污会在凝胶溶液中形成隔离层，使试剂无法充分接触和反应。
- 解决方法：每次使用后，及时清洗制胶模具。先用清水冲洗模具表面的凝胶残渣，然后用洗洁精等清洁剂仔细刷洗，去除油污和杂质。清洗后，用蒸馏水冲洗干净，并晾干或烘干备用。在使用前，再次检查模具是否干净，可使用酒精棉球擦拭模具表面，进一步消毒和清洁。

2. 氧气干扰

- 原因：氧气是聚合反应的抑制剂，凝胶溶液在配制和灌胶过程中若接触过多氧气，会抑制过硫酸铵分解产生自由基，从而阻碍丙烯酰胺的聚合。例如，在灌胶时，若胶液与空气接触面积过大，或者灌胶速度过慢，导致胶液长时间暴露在空气中，都可能使氧气大量溶入胶液，影响凝胶凝固。
- 解决方法：在配制凝胶溶液时，尽量减少溶液与空气的接触时间。可以使用带塞子的容器，在加入试剂后迅速盖上塞子。灌胶时，将移液器枪头深入到制胶模具底部，缓慢匀速地注入胶液，减少胶液与空气的接触面积。同时，灌胶速度要适中，避免胶液长时间暴露在空气中。若条件允许，可在惰性气体环境下进行制胶操作，如在氮气氛围中配制和灌胶。

五、预防凝胶不凝固的措施

1. 建立试剂管理体系：对实验试剂进行详细登记，记录试剂的名称、规格、生产日期、保质期、采购日期等信息。定期检查试剂库存，及时清理过期试剂，确保使用的试剂都在有效期内且质量可靠。
2. 严格规范操作流程：制定详细的制胶操作标准操作规程（SOP），要求实验人员严格按照流程操作。定期对实验人员进行培训和考核，确保其熟练掌握制胶技能，减少因操作失误导致的凝胶不凝固问题。
3. 维护实验环境与仪器：保持实验室环境整洁，定期清洁制胶模具、电泳仪等仪器设备。控制好实验室的温度和湿度，为实验提供稳定的环境条件。同时，定期对仪器进行维护和校准，确保仪器正常运行。

使用DYCZ - 24KF型四板垂直电泳仪时凝胶不凝固是一个复杂的问题，涉及试剂、操作、仪器等多个方面。通过深入分析原因，并采取针对性的解决对策和预防措施，我们能够有效解决这一问题，保障实验的顺利进行，提高实验结果的准确性和可靠性。如果你在实验过程中遇到凝胶不凝固的问题，欢迎在评论区留言分享，我们一起探讨解决方案，共同推动实验的成功开展。

本文由北京六一生物编辑整理。

北京六一生物科技有限公司创建于1970年，50多年的历史，公司先后3次承担电泳装置产品国家、行业标准的起草、修订工作，2009年负责《基础电泳装置》国家标准已发布实施。专业生产生物化学与分子生物学检验分析仪器的科技型国有企业。

主要生产包含电泳仪、紫外分析仪、凝胶成像分析系统、酶标仪、化学发光成像系统、基因扩增仪等检验分析设备。

如果您对我们的产品有任何问题，欢迎您的来电：400 960 6117

我们的目标是：做生物化学分析仪器行业海尔

标签：