Western blot与核酸电泳场景下DYY-12参数预设模板

作者：六一生物发布时间：2025-04-23 09:03:54 点击：

在生命科学研究领域，Western blot和核酸电泳是常用的实验技术，而DYY - 12电泳仪凭借其稳定性能成为众多实验室的选择。然而，不同实验场景对电泳仪参数要求各异，合理预设参数是实验成功的关键。本文将分别针对Western blot与核酸电泳，提供DYY - 12参数预设模板及详细使用指南。

一、Western blot实验中DYY - 12参数预设

（一）转印阶段参数预设

1. 电压与电流设置

在Western blot转印过程中，恒流模式更有利于蛋白质从凝胶转移到膜上。对于常规的SDS - PAGE凝胶（凝胶厚度0.75 - 1.0mm），转印时电流通常可设置为100 - 150mA。若凝胶厚度增加至1.5mm，为保证转印效率，电流可适当提高至150 - 200mA 。但需注意，电流不宜过高，否则可能产生过多热量，导致蛋白质变性。在恒流模式下，电压会根据负载自动调整，一般控制在20 - 80V之间，具体数值会因凝胶、膜和缓冲液等因素有所不同。

2. 时间设置

转印时间需根据蛋白质分子量大小进行调整。对于小分子蛋白质（分子量小于20kDa），转印时间可设置为40 - 60分钟；中等分子量蛋白质（20 - 60kDa），转印时间为60 - 90分钟；大分子蛋白质（大于60kDa），转印时间通常需要90 - 120分钟。在实际操作中，可通过预实验来优化转印时间，以确保蛋白质完全转移且条带清晰。

3. 温度控制

转印过程中产生的热量可能影响蛋白质活性和转印效果，因此需关注温度。若DYY - 12电泳仪配备冷却装置，可将温度设置在4 - 10℃ ，减缓蛋白质降解和变性。若没有冷却装置，可在转印槽周围放置冰盒，降低环境温度，保证转印过程顺利进行。

（二）电泳分离阶段参数预设

1. 电压与电流设置

在SDS - PAGE电泳分离蛋白质时，可采用恒压模式。对于浓缩胶部分，电压设置在80 - 100V，使蛋白质样品在浓缩胶中充分浓缩；进入分离胶后，将电压提高至120 - 150V ，加快蛋白质在分离胶中的迁移速度，实现有效分离。在恒压模式下，电流会随着电泳进行而逐渐减小，这属于正常现象。此阶段电流初始值一般在10 - 20mA左右，随着电泳推进，电流会降至5 - 10mA 。

2. 时间设置

电泳时间根据凝胶浓度和蛋白质样品情况而定。常见的10% - 12%分离胶，电泳时间约为1.5 - 2小时。当溴酚蓝指示剂迁移至凝胶底部附近时，即可停止电泳。但需注意，若电泳时间过长，可能导致小分子蛋白质跑出凝胶；时间过短，则蛋白质分离不充分，因此需根据实际情况精确控制时间。

二、核酸电泳实验中DYY - 12参数预设

（一）琼脂糖凝胶电泳参数预设

1. 电压设置

核酸电泳通常采用恒压模式。对于不同浓度的琼脂糖凝胶，电压设置有所差异。0.8% - 1%的琼脂糖凝胶适用于分离较大片段的DNA（500 - 10000bp），电压可设置在80 - 120V；1.2% - 1.5%的凝胶适合分离中等大小的DNA片段（100 - 5000bp），电压设置为100 - 150V；若要分离较小的DNA片段（100 - 1000bp），使用1.8% - 2%的凝胶，电压可提高至120 - 180V 。需注意，电压过高会使DNA迁移速度过快，导致条带分辨率降低；电压过低则会延长电泳时间，增加DNA扩散，影响实验效率和结果准确性。

2. 时间设置

电泳时间与电压、凝胶浓度和DNA片段大小相关。在上述电压设置下，电泳时间一般为30 - 90分钟。可通过观察DNA marker的迁移情况来判断电泳进程，当目标DNA片段与预期位置相符时，停止电泳。例如，分离1000bp左右的DNA片段，在1.2%的琼脂糖凝胶、120V电压下，电泳时间约45 - 60分钟。

3. 缓冲液选择与浓度

常用的核酸电泳缓冲液为TAE（Tris - 乙酸 - EDTA）或TBE（Tris - 硼酸 - EDTA）。TAE缓冲液的缓冲能力较弱，但分辨率较高；TBE缓冲液缓冲能力强，适用于长时间电泳。一般使用1×浓度的缓冲液，若要提高分辨率，可使用0.5×浓度的TBE缓冲液。同时，注意缓冲液的使用次数，多次使用后缓冲能力下降，可能影响电泳效果，建议及时更换。

（二）聚丙烯酰胺凝胶电泳参数预设

1. 电压与电流设置

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离核酸时，可根据实验需求选择恒压或恒流模式。恒压模式下，对于分离小分子核酸（如RNA片段或短链DNA），电压可设置在150 - 250V；恒流模式下，电流设置在15 - 30mA 。在电泳过程中，需密切关注电压和电流的变化，若出现异常波动，可能是凝胶不均匀或缓冲液问题，需及时排查。

2. 时间设置

聚丙烯酰胺凝胶电泳时间相对较长，一般为2 - 4小时，具体时间取决于核酸片段大小和凝胶浓度。高浓度凝胶（如20%）适合分离小片段核酸，电泳时间可适当缩短；低浓度凝胶（如8%）用于分离大片段核酸，电泳时间相应延长。实验过程中，可通过观察指示剂的迁移情况，结合核酸样品的预期位置，确定合适的电泳结束时间。

三、参数预设注意事项

（一）实验前准备工作

在预设参数前，需检查DYY - 12电泳仪的运行状态，确保设备正常。同时，准备好实验所需的试剂、耗材，如缓冲液、凝胶、膜等，并确保其质量合格。仔细阅读电泳仪使用说明书，了解各参数的设置范围和限制，避免因参数设置不当损坏设备或影响实验结果。

（二）灵活调整参数

不同实验室的实验条件、样品特性存在差异，预设参数模板仅作为参考。在实际操作中，需根据具体情况灵活调整参数。例如，当样品浓度较高时，可适当降低电压或电流，延长电泳时间，避免条带拖尾；若样品杂质较多，可优化缓冲液配方或增加电泳时间，提高分离效果。

（三）记录与总结

每次实验完成后，详细记录预设参数、实际运行参数以及实验结果。通过对实验数据的分析和总结，不断优化参数设置，积累实验经验，提高实验成功率和准确性。建立实验参数记录档案，方便后续实验参考和对比。

Western blot与核酸电泳实验中，合理预设DYY - 12电泳仪参数是实验成功的重要保障。通过本文提供的参数预设模板和使用指南，结合实际实验情况进行调整和优化，能够帮助实验人员获得理想的实验结果，推动生命科学研究工作的顺利开展。在实验过程中，若遇到问题或对参数设置有疑问，可及时查阅相关资料或咨询专业人士。

本文由北京六一生物编辑整理。

北京六一生物科技有限公司创建于1970年，50多年的历史，公司先后3次承担电泳装置产品国家、行业标准的起草、修订工作，2009年负责《基础电泳装置》国家标准已发布实施。专业生产生物化学与分子生物学检验分析仪器的科技型国有企业。

主要生产包含电泳仪、紫外分析仪、凝胶成像分析系统、酶标仪、化学发光成像系统、基因扩增仪等检验分析设备。

如果您对我们的产品有任何问题，欢迎您的来电：400 960 6117

我们的目标是：做生物化学分析仪器行业海尔

标签：