Western Blot跑胶总失败？可能是电流设置没搞对！

作者：六一生物发布时间：2025-05-22 09:29:33 点击：

做Western Blot时，跑胶失败堪称“科研人噩梦”——条带模糊、跑不下来、甚至凝胶发热变形……这些问题很可能和电泳仪的电流设置有关。别担心，今天就用“人话”讲讲电流那些事儿，哪怕是实验新手也能轻松看懂！

一、电流是什么？为啥影响跑胶？

简单说，电流就是蛋白在凝胶里“游泳”的“动力”。电流太小，蛋白游得慢，甚至卡在凝胶里；电流太大，蛋白可能“累晕”（变性），凝胶也会“发烧”（发热变形）。

关键原理：

- 电流 = 电压 ÷ 电阻（就像水流速度 = 水压 ÷ 管道阻力）。
- 凝胶越“密”（浓度高）、缓冲液越“稀”，电阻越大，电流越小。

二、跑胶常见问题与电流的关系

1. 条带模糊拖尾：电流可能太大或太小

- 太大：凝胶发热，蛋白“煮糊”变性，条带扩散。
*例子*：用15%的凝胶跑小分子蛋白，还开25mA电流，结果条带像“毛边纸”。
- 太小：蛋白没动力，在凝胶里“散步”，扩散导致模糊。

*例子*：大蛋白（如100kDa）用10mA电流，跑了2小时还没出孔，条带变宽。

2. 跑胶时间长，蛋白滞留在胶里：电流太小

- 大蛋白“体重沉”，需要更大动力（电流）才能“游”出来。
- *错误操作*：不管蛋白大小，统一用15mA电流，结果大蛋白卡在胶中间。

3. 凝胶发热变形：电流太大，散热没做好

- 电流大时，凝胶像“小太阳”会发热，尤其是厚胶（如1.5mm）。
- *后果*：凝胶融化，蛋白迁移路径乱套，条带歪歪扭扭。

三、电流设置的“傻瓜式”技巧

1. 根据蛋白大小选电流：分阶段调整

- 小蛋白（＜20kDa）：
- 开始用10mA（防止跑太快飘走），20分钟后升到15mA。
- 中等蛋白（20-100kDa）：
- 直接用15-20mA，稳定又安全。
- 大蛋白（＞100kDa）：
- 用20-25mA（动力足），但要注意散热（下面会讲）。

2. 看凝胶厚度调电流：越厚电流越大

- 薄胶（1mm）：15-20mA，室温跑就行。
- 厚胶（1.5mm）：20-25mA，建议放冰盒上跑（降温）。
- 超厚胶（2mm）：25-30mA，必须用低温电泳槽（或放冰箱4℃跑）。

3. 新手必备：恒压vs恒流模式怎么选？

- 恒压模式（电压固定）：
- 适合刚开始跑（积层胶阶段），让蛋白排队整齐进分离胶，推荐80V。
- 恒流模式（电流固定）：
- 分离胶阶段用，推荐从15mA开始，根据蛋白大小微调。

四、跑胶不踩坑的实用Tips

1. 缓冲液别偷懒：换新的！

- 旧缓冲液离子少，电阻大，电流上不去，蛋白跑不动。
- *正确操作*：每次跑胶用新配的缓冲液，上下槽分开用（上槽用新的，下槽用旧的）。

2. 散热妙招：给凝胶“降温”

- 冰浴法：找个大盒子装冰水，把电泳槽放进去（水位别超过槽口）。
- 风扇法：拿个小风扇对着电泳槽吹，尤其是夏天。
- 低温实验室：如果有条件，在20℃左右的房间跑胶，效果更好。

3. 预实验：花10分钟试条件

- 用不同电流跑一块胶（比如左边15mA，右边20mA），对比条带效果，找到最佳参数。
- *例子*：跑一个已知分子量的标准品（Marker），看条带是否清晰、位置是否正确。

五、常见问题Q&A

Q1：电流不稳定，忽高忽低怎么办？
- A：检查电极是否生锈（用酒精擦干净）、缓冲液是否混匀，或者换一台电泳仪试试。

Q2：转膜时电流怎么选？
- A：湿转通常用300mA恒流，转90分钟。如果蛋白大，可适当提高电流（但别超过400mA）。

Q3：跑胶时能离开吗？
- A：建议前30分钟守着，观察电流是否稳定、凝胶是否发热，没问题了再忙别的。

Western Blot跑胶失败别慌，先看看电流设置是不是“踩雷”。记住：小蛋白用小电流、大蛋白用大电流，厚胶要散热，缓冲液别省钱！多试几次，找到适合自己实验的“黄金参数”，从此告别“跑胶噩梦”，轻松拿到漂亮条带～

本文由北京六一生物编辑整理。

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