实验室新手必看！电泳仪正确操作流程及避坑指南

作者：六一生物发布时间：2025-06-04 09:17:37 点击：

刚踏入实验室的新手，面对电泳仪这个精密仪器，既充满好奇又满心忐忑。看着师兄师姐行云流水般操作，自己上手时却状况百出。别担心！掌握电泳仪正确操作流程，避开常见“大坑”，你也能成为实验小能手。接下来就为大家详细讲解，助力新手快速入门。

一、操作前的准备工作：细节决定成败

1. 检查仪器与耗材

- 电泳仪主机检查：仔细查看电泳仪外观有无破损，显示屏是否正常显示，各个按钮和接口是否松动。按下电源开关，听一听仪器启动时是否有异常声响，若出现刺耳杂音或显示屏无反应，切勿自行拆卸，应立即联系实验室管理员或专业维修人员。
- 电泳槽与配件：检查电泳槽是否干净，有无残留的凝胶或杂质，避免对后续实验造成污染。确认电极丝是否完好，无断裂或氧化现象。同时，准备好所需的凝胶板、梳子、电泳缓冲液等耗材，确保它们的规格与电泳仪匹配。例如，不同型号的电泳仪适用的凝胶板尺寸不同，选错可能导致凝胶无法正常放置。
- 样品准备：对待测样品进行预处理，确保样品浓度合适且均匀。若样品浓度过高，需进行稀释；若样品中有沉淀或杂质，要通过离心等方式去除。以核酸样品为例，浓度过高会导致条带拖尾或无法分离，浓度过低则可能检测不到目标条带。

2. 配制凝胶：精确配比是关键

- 选择合适的凝胶类型：根据实验目的和样品特性选择凝胶，如分离核酸常用琼脂糖凝胶，分离蛋白质则多使用聚丙烯酰胺凝胶。新手容易混淆两种凝胶的适用范围，用错凝胶会使实验结果完全错误。
- 准确称量试剂：严格按照配方称量凝胶原料和相关试剂，误差要控制在极小范围内。称量琼脂糖时，若用量过多，凝胶会过硬，样品迁移困难；用量过少，凝胶则太软，容易破碎。溶解琼脂糖时，要使用合适的容器，在加热过程中不断搅拌，确保完全溶解，避免出现颗粒影响凝胶质量。
- 灌注凝胶：将溶解后的凝胶溶液冷却至合适温度后，缓缓倒入凝胶模具中，并插入梳子。灌注过程中动作要平稳，避免产生气泡。若凝胶中有气泡，会在电泳时影响样品迁移路径，导致条带变形。待凝胶完全凝固后，小心拔出梳子，形成加样孔。

二、电泳操作流程：按部就班不出错

1. 安装凝胶与添加缓冲液

- 安装凝胶板：将凝固好的凝胶板小心放入电泳槽中，确保凝胶板与电泳槽紧密贴合，避免缓冲液渗漏。有些新手在安装时过于用力，可能导致凝胶板破裂；而安装不紧密则会使电场分布不均匀，影响实验结果。
- 添加缓冲液：向电泳槽中加入适量的电泳缓冲液，液面要没过凝胶板，但也不能过高，防止缓冲液溢出。注意，前后槽的缓冲液要分开配制和使用，不能混用。如果将前后槽缓冲液混用，会改变电场强度和方向，导致样品无法正常分离。

2. 上样：稳、准、轻是要点

- 准备上样枪：选择合适量程的移液器，并安装干净的枪头。新手容易忽略枪头的清洁，使用污染的枪头会导致样品交叉污染，影响实验准确性。
- 吸取样品：垂直持握移液器，缓慢吸取适量样品，避免吸入气泡。将枪头垂直插入加样孔底部，缓慢推出样品，动作要轻柔，防止样品溅出或扩散到相邻加样孔。如果样品溅出，不仅会污染其他样品，还会导致上样量不准确；而样品扩散则会使条带模糊不清。

3. 启动电泳：密切关注运行状态

- 设置参数：根据实验要求，在电泳仪上设置合适的电压、电流和电泳时间。不同的样品和凝胶浓度所需的电泳条件不同，例如，分离小片段核酸可适当提高电压，缩短电泳时间；分离大片段核酸则需要较低电压和较长时间。新手往往对电泳条件设置把握不好，设置不当会使条带分离效果差，甚至无法分离。
- 开始电泳：确认参数设置无误后，启动电泳仪。此时要注意观察电极是否产生气泡，这是电泳正常进行的标志之一。如果电极不产生气泡，可能是电极连接有问题或缓冲液失效，应立即停止电泳进行检查。在电泳过程中，不要随意移动电泳仪，避免影响电场稳定性。

三、常见“坑点”及避坑指南：新手少走弯路

1. 样品问题导致的失败

- 样品污染：在样品处理和上样过程中，要严格遵守无菌操作原则，使用一次性手套和无菌耗材。如果操作台上有其他样品残留，未及时清理，很容易造成交叉污染。一旦样品污染，跑胶结果会出现异常条带，导致实验白费。
- 上样量不一致：不同加样孔的上样量要保持一致，否则会影响条带的可比性。可以在吸取样品前，先将移液器的量程调整好，并在吸取样品后，在管壁上轻轻触碰，使枪头内的液体量一致。有些新手为了节省时间，随意上样，导致条带有的浓有的淡，无法准确分析实验结果。

2. 凝胶相关问题

- 凝胶未完全凝固：如果在凝胶未完全凝固时就进行电泳，凝胶会在电场作用下变形，导致条带扭曲。因此，一定要耐心等待凝胶完全凝固，可以通过轻轻晃动模具，观察凝胶表面是否平整来判断。若表面有波纹，说明还未完全凝固。
- 凝胶干裂：凝胶在放置过程中，如果环境过于干燥，容易干裂。为了防止这种情况发生，可以在凝胶表面覆盖一层保鲜膜，保持湿度。干裂的凝胶会使样品迁移受阻，条带不完整。

3. 电泳仪操作问题

- 电压设置过高：过高的电压会产生大量热量，导致凝胶融化，样品变性，条带模糊不清。在设置电压时，要参考实验手册和相关文献，从较低电压开始尝试，逐步调整。有些新手急于求成，设置过高电压，结果实验失败，还可能损坏电泳仪。
- 电泳时间过长或过短：电泳时间过长，样品会在凝胶中过度迁移，出现扩散现象；时间过短，样品则无法充分分离。可以在电泳过程中，通过观察指示剂的迁移位置来判断电泳是否完成。如果不确定时间，可先进行预实验，摸索出合适的电泳时间。

掌握了电泳仪正确操作流程和避坑指南，新手们在实验中就能更加得心应手。每一次实验都是成长的机会，只要细心、耐心，注重细节，相信大家都能顺利完成实验，取得理想的结果！在实验过程中如果还有其他问题，欢迎随时交流探讨，共同进步。

本文由北京六一生物编辑整理。

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