电泳仪凝胶老是凝固不好？原来问题出在这4个细节

作者：六一生物发布时间：2025-06-04 09:18:58 点击：

在分子生物学实验里，电泳是分离和分析核酸、蛋白质等生物大分子的关键技术，而凝胶作为电泳的“舞台”，其凝固状态直接决定实验成败。不少实验新手甚至老手都曾遇到过这样的糟心事：辛辛苦苦配好的凝胶，要么迟迟不凝固，要么凝固后软塌塌、不均匀，根本无法正常使用。别着急，今天就为大家揪出导致电泳仪凝胶老是凝固不好的4个关键细节，助你顺利攻克实验难题。

一、试剂配比：差之毫厘，谬以千里

1. 凝胶原料称量不准确

琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶是电泳实验中最常用的两种凝胶类型，无论哪种，精确称量原料都是凝胶成功凝固的第一步。以琼脂糖凝胶为例，如果称量的琼脂糖过少，凝胶的浓度就会不足，导致凝固后质地过软，无法支撑样品的迁移；反之，琼脂糖过多，凝胶则会过硬，不仅样品难以在其中迁移，还容易出现干裂。

曾经有位实验员为了图省事，没有仔细校准天平就称量琼脂糖，结果跑胶时发现凝胶软得像“果冻”，样品在里面根本无法正常分离，整个实验只能重新来过。所以，每次称量凝胶原料前，一定要检查天平是否归零、准确，最好进行多次称量取平均值，确保称量误差控制在最小范围内。

2. 引发剂与增速剂用量不当

对于聚丙烯酰胺凝胶来说，引发剂（如过硫酸铵）和增速剂（如TEMED）的用量至关重要，它们直接影响凝胶的聚合反应。如果引发剂和增速剂用量不足，聚合反应就会缓慢甚至无法进行，凝胶迟迟不能凝固；而用量过多，反应速度过快，会导致凝胶内部产生大量气泡，质地不均匀，还可能使凝胶过热，影响其理化性质。

有实验室在制备聚丙烯酰胺凝胶时，因为急于完成实验，加大了引发剂和增速剂的用量，结果凝胶在短时间内快速凝固，表面布满气泡，最后不得不重新配制。因此，一定要严格按照配方规定的比例添加引发剂和增速剂，并且在添加后迅速混匀，开始灌胶，避免试剂在容器内提前发生反应。

二、溶解与混合：细节决定成败

1. 琼脂糖溶解不充分

在制备琼脂糖凝胶时，完全溶解琼脂糖是关键。很多人在加热溶解琼脂糖时，没有充分搅拌或者加热时间不够，导致琼脂糖颗粒残留。这些未溶解的颗粒不仅会影响凝胶的均匀性，还会阻碍凝胶的正常凝固。

比如，有的实验员只是简单地将琼脂糖放入缓冲液中加热，看到溶液表面没有明显颗粒就以为溶解好了，结果灌胶后发现凝胶中有白色的“斑点”，这些就是未溶解的琼脂糖。正确的做法是使用磁力搅拌器边加热边搅拌，确保琼脂糖完全溶解，溶液变得澄清透明。如果使用微波炉加热，要注意分次加热，每次加热后取出充分摇匀，防止溶液暴沸。

2. 混合不均匀

无论是琼脂糖凝胶还是聚丙烯酰胺凝胶，在添加各种试剂后都需要充分混合均匀。如果混合不充分，凝胶中不同部位的成分和浓度就会存在差异，导致凝固效果不一致。

以聚丙烯酰胺凝胶为例，在加入引发剂和增速剂后，要轻轻摇晃或用玻璃棒缓慢搅拌溶液，确保试剂均匀分布在整个体系中。但搅拌时动作不能过于剧烈，以免产生过多气泡。曾经有实验室制备的聚丙烯酰胺凝胶出现上半部分凝固正常，下半部分却呈液态的情况，就是因为混合不均匀导致的。

三、温度与环境：不可忽视的外在因素

1. 冷却温度不合适

琼脂糖凝胶在溶解后需要冷却到合适的温度才能灌胶。如果温度过高，灌胶时凝胶溶液容易产生气泡，而且高温还可能破坏梳子的结构；如果温度过低，琼脂糖会提前开始凝固，导致灌胶困难，凝胶出现分层。

一般来说，琼脂糖凝胶溶液冷却到50 - 60℃时灌胶比较合适，这个温度既可以避免溶液快速凝固，又能减少气泡的产生。可以使用温度计测量溶液温度，或者通过触摸容器外壁来大致判断，当容器壁不再烫手时，就可以进行灌胶操作了。

2. 环境温度与湿度影响

实验室的环境温度和湿度对凝胶凝固也有一定影响。在温度较低的环境中，凝胶的凝固速度会变慢；而湿度过高，空气中的水分可能会进入凝胶，影响其凝固效果和质量。

例如，在寒冷的冬季，有的实验室会将空调温度设置得过低，结果发现聚丙烯酰胺凝胶的凝固时间比平时延长了一倍多。此时，可以适当提高实验室温度，或者将灌好胶的模具放在恒温箱中促进凝固。同时，保持实验室环境干燥，避免在潮湿的天气进行凝胶制备实验，必要时可以使用除湿机控制湿度。

四、操作规范：小失误酿大问题

1. 模具清洁不到位

干净的模具是制备高质量凝胶的基础。如果模具表面残留有杂质、油污或之前实验的凝胶碎片，会阻碍凝胶与模具的紧密贴合，导致凝胶边缘不整齐，甚至出现渗漏，影响凝固效果。

每次使用模具前，都要用洗涤剂彻底清洗，然后用清水冲洗干净，最好再用蒸馏水冲洗一遍，晾干后备用。对于反复使用的模具，要定期进行深度清洁和消毒，可以使用酒精擦拭或浸泡在稀盐酸溶液中去除顽固污渍。

2. 灌胶操作不当

灌胶过程看似简单，实则暗藏玄机。灌胶时速度过快，容易产生气泡；速度过慢，凝胶可能在灌胶过程中就开始凝固。而且，灌胶时要确保模具水平放置，否则凝胶厚度不均匀，会影响电泳结果。

正确的灌胶方法是将凝胶溶液沿着模具一侧缓慢倒入，尽量避免产生气泡。如果不小心产生了气泡，可以用干净的枪头将气泡轻轻挑破。灌胶完成后，要静置一段时间，让凝胶自然凝固，在这个过程中不要移动模具，以免破坏凝胶结构。

掌握了这4个导致电泳仪凝胶凝固不好的关键细节，相信大家在今后的实验中能够制备出理想的凝胶，让电泳实验顺利进行。实验无小事，每一个细节都可能影响最终结果，只有严谨认真地对待每一个操作步骤，才能收获准确可靠的实验数据。下次再遇到凝胶凝固不好的问题，就按照这些要点逐一排查解决吧！

本文由北京六一生物编辑整理。

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