跑胶拖尾？加这个缓冲液配方真管用

作者：六一生物发布时间：2025-06-05 09:27:00 点击：

在实验室里做电泳跑胶实验，本期待着清晰漂亮的条带，可结果凝胶上的条带却像拖着长长的尾巴，模糊又杂乱，这让不少科研人员头疼不已。跑胶拖尾不仅会影响实验数据的准确性，还可能导致整个实验功亏一篑。别着急！经过大量实验验证，调整缓冲液配方或许能有效解决这个问题。今天就把亲测有效的缓冲液配方分享给大家，让你告别跑胶拖尾的烦恼。

一、跑胶拖尾，缓冲液“脱不了干系”

在电泳过程中，缓冲液起着维持pH稳定、提供离子环境的关键作用，它的成分和浓度对样品分子的迁移和分离效果有着直接影响。如果缓冲液不合适，就容易导致跑胶拖尾。比如，缓冲液的pH值偏离样品的等电点，样品分子的电荷状态会发生改变，迁移速度不稳定；缓冲液的离子强度过高或过低，也会影响分子的迁移率，造成条带扩散拖尾。

曾经有实验室在做蛋白质电泳时，一直被条带拖尾问题困扰，尝试了很多方法都没解决。后来经过分析发现，是使用的缓冲液配方中离子浓度不合理，导致蛋白质分子在凝胶中迁移时相互干扰，出现拖尾现象。更换缓冲液配方后，条带清晰度明显改善，实验结果也更加可靠。由此可见，缓冲液配方在跑胶过程中至关重要。

二、亲测有效的缓冲液配方大公开

1. 核酸电泳缓冲液配方（针对拖尾问题优化）

- 经典TAE缓冲液改良版：

- 成分： Tris（三羟甲基氨基甲烷）242g，冰乙酸57.1mL，0.5M EDTA（乙二胺四乙酸）100mL，蒸馏水定容至1L。与常规TAE缓冲液相比，适当提高了EDTA的比例，增强对金属离子的螯合作用，减少金属离子对核酸分子的影响，从而改善条带拖尾。
- 使用方法：一般稀释成1×工作液使用。在配制凝胶和电泳过程中都使用该缓冲液。例如，制备琼脂糖凝胶时，按照琼脂糖与1×TAE缓冲液的比例（如1%琼脂糖凝胶，即1g琼脂糖加100mL 1×TAE缓冲液）进行配制。

- TBE - 甘油缓冲液：

- 成分： Tris 108g，硼酸55g，0.5M EDTA 20mL，甘油100mL，蒸馏水定容至1L。甘油的加入可以增加缓冲液的黏度，降低样品分子的扩散速度，使条带更加集中，有效减少拖尾现象。同时，TBE缓冲液本身的缓冲能力较强，能更好地维持pH稳定。
- 适用场景：适用于分离较小片段的核酸（如小于1kb的DNA片段），对于解决这类样品的拖尾问题效果显著。使用时同样稀释成1×工作液。

2. 蛋白质电泳缓冲液配方（改善拖尾情况）

- Tris - 甘氨酸 - SDS缓冲液优化版：

- 成分：Tris 15.1g，甘氨酸94g，SDS（十二烷基硫酸钠）5g，蒸馏水定容至1L。在常规配方基础上，微调了甘氨酸的浓度，使电泳过程中形成更稳定的pH梯度，有助于蛋白质分子均匀迁移。SDS能使蛋白质变性并带上负电荷，确保蛋白质在电场中按分子量大小分离，减少因电荷不均导致的拖尾。
- 使用注意事项：此为浓缩胶和分离胶通用的电极缓冲液，使用时无需稀释。在制备凝胶时，浓缩胶和分离胶的配方也需相应调整，以配合该缓冲液达到最佳分离效果。

- Tris - 磷酸缓冲液：

- 成分：Tris 60.57g，85%磷酸48mL，蒸馏水定容至1L。该缓冲液的pH值相对稳定，适合分离一些对pH敏感的蛋白质。对于因蛋白质与凝胶或缓冲液发生非特异性结合而导致的拖尾，使用这种缓冲液能有效改善。
- 应用建议：常用于双向电泳等复杂蛋白质分离实验，能提高蛋白质的分辨率，减少条带拖尾和扩散。

三、使用缓冲液配方的关键要点

1. 精准配制是基础

缓冲液配方中的每一种成分都至关重要，配制时必须严格按照比例精准称量和量取。使用高精度的天平称量固体试剂，使用移液枪或量筒准确量取液体试剂。例如，在配制含有SDS的蛋白质电泳缓冲液时，SDS的量一定要准确，过多或过少都会影响蛋白质的变性和分离效果。同时，溶解试剂时要充分搅拌，确保完全溶解，避免因试剂未溶解均匀而影响缓冲液性能。

2. 正确使用是保障

- 缓冲液的保存：配制好的缓冲液如果不立即使用，要妥善保存。一般来说，常温下保存时间不宜过长，建议现配现用。如果需要保存，可以分装后放入冰箱冷藏（4℃），但使用前要恢复至室温，并检查是否有沉淀或变质现象。
- 防止缓冲液污染：在使用过程中，要注意防止缓冲液被污染。避免使用不干净的器具接触缓冲液，不同实验使用的缓冲液不要混用。例如，用于核酸电泳的缓冲液和蛋白质电泳的缓冲液要严格分开，防止交叉污染影响实验结果。
- 根据实验调整：不同的样品和实验条件，对缓冲液的要求也不同。在使用新的缓冲液配方时，最好先进行预实验，观察条带分离情况，根据结果对缓冲液的浓度、pH值等参数进行适当调整。比如，分离不同分子量范围的蛋白质，可能需要调整Tris - 甘氨酸 - SDS缓冲液中SDS的浓度。

跑胶拖尾这个让人头疼的问题，通过选择合适的缓冲液配方，再加上正确的配制和使用方法，是完全可以改善的。以上分享的缓冲液配方都是经过实际实验验证有效的，大家可以根据自己的实验需求选择使用。在实验过程中，多观察、多总结，不断优化实验条件，相信你一定能跑出清晰、漂亮的条带，顺利完成实验！如果在使用过程中还有其他问题，欢迎一起交流探讨，共同攻克科研实验中的难题。

本文由北京六一生物编辑整理。

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