电泳实验细节优化：提升实验成功率的关键要点

作者：六一生物发布时间：2025-08-21 09:20:00 点击：

做电泳实验第三年，我终于摆脱了“跑胶全凭运气”的困境——前两年总在重复“配胶-上样-跑废-重配”的循环，光因为条带歪、胶漏液浪费的试剂，就能买两箱离心机耗材。直到实验室那位退休返聘的张老师，指着我刚灌好的胶说“你看这梳孔，歪得跟蛇似的，条带能跑正才怪”，我才意识到：电泳实验的成败，全藏在那些没人特意教的细节里。现在我把这些“抠细节”的实战心得整理出来，每个要点都带着我踩过的坑，新手照着做，跑胶成功率能直接提上来。

一、灌胶：别让“温差”和“手抖”毁了第一步

灌胶是跑胶的基础，以前我总觉得“把胶倒进去等凝就行”，结果要么胶里裹满气泡，要么梳孔歪得没法上样，后来才发现，哪怕是“倒胶”这个简单动作，都有优化空间。

1. 胶液降温：用37℃水浴“温着”，比室温快10分钟

第一次灌胶时，刚煮好的胶液（快60℃）直接倒进槽，不仅把胶槽底部的密封垫烫变形，胶还凝得一块厚一块薄。张老师教我：胶液煮好后别等凉透，放进37℃水浴锅温5分钟，用手摸烧瓶外壁，不烫就行。现在我每次煮胶前，都会先把水浴锅调到37℃，胶液煮好直接放进去，倒的时候温度刚好45℃左右，既不会烫坏胶槽，灌完15分钟就能凝，比等凉到室温快了足足10分钟。

有次实验室水浴锅坏了，我就把烧瓶放在装着温水的烧杯里“保温”，效果一样好——关键是别让胶液温度忽高忽低，不然凝出来的胶密度不均，跑条带时肯定歪。

2. 倒胶手法：贴着槽壁“慢流”，气泡少到不用挑

以前倒胶总跟赶火车似的，烧瓶一斜，胶液“哗啦”倒进槽，结果裹了一肚子气泡，用牙签挑半天还挑不干净，跑胶时气泡处的条带直接断成两截。现在我倒胶时，会把烧瓶嘴贴紧胶槽内壁，像倒红酒那样慢慢倾斜，让胶液顺着槽壁“流”进去，而不是“冲”进去。这样倒出来的胶，基本没什么气泡，偶尔有个小气泡，用牙签尖轻轻戳一下，气泡就浮上来了，比以前省了5分钟挑气泡的时间。

上周带本科生做实验，有个同学倒胶太快，胶里全是气泡，我让他按我的方法重新倒，第二次就几乎没气泡了——手法这东西，练一次就有感觉。

3. 插梳时机：等胶“粘手不沾手”再插，梳孔比尺子还正

新手最容易犯的错，就是灌完胶立马插梳，结果胶没凝住，梳子一插就歪，还把胶戳出洞。我以前就这么干过，梳孔歪得没法上样，只能把胶抠出来重新灌。现在灌完胶，我会等3分钟，用手指轻轻碰一下胶液表面：感觉有点黏，但不粘手（就像刚从冰箱拿出来的果冻），再慢慢把梳子插进去。插的时候要垂直往下，别左右晃，插到底后轻轻转一下梳子，确保梳孔边缘和胶贴紧，这样上样时绝不会漏液。

上次师妹按我的方法插梳，梳孔比她之前歪歪扭扭的样子整齐太多，上样时样品全乖乖待在孔里，没漏一滴。

二、上样：别让“手抖”和“粗心”浪费样品

上样时手一抖、加错量，整板胶可能就白跑了。我以前因为上样失误，浪费过珍贵的酶切样品，现在总结出两个小技巧，上样又快又准。

1. 样品稀释：按“孔容量”算体积，别贪多

有次为了让条带更亮，我把上样量从10μL加到20μL，结果样品从梳孔溢出来，不仅自己的条带拖尾，还污染了旁边的样品孔。后来查胶槽说明书才知道，我们用的梳孔容量只有15μL，超过这个量肯定漏。现在我每次上样前，都会先测样品浓度，浓度高就用TE缓冲液稀释，确保上样量控制在12-15μL之间——哪怕条带淡一点，也比漏样污染强。

如果样品浓度实在太低，我就用真空浓缩仪浓缩，浓缩后再上样，条带又亮又清晰，还不会溢样。

2. 上样工具：用8通道排枪，加错孔的概率降为零

以前用单道移液器上样，24个样品得加8分钟，手酸得不行，还总怕数错孔。有次加着加着，把阴性对照加到了阳性样品孔里，结果数据全乱了，只能重新做实验。现在我换成8通道排枪，先把样品按顺序在离心管架上摆好，吸一次能加8个样，3分钟就能上完所有样品，手也不酸了。

上样时我还有个小习惯：在离心管架上贴标签，写清楚“1-8”“9-16”，加完一列就划掉一列，再也没加错过孔。上次带6个本科生上样，用排枪的同学没一个加错，比用单道移液器的成功率高太多。

三、跑胶：别让“参数乱调”和“温度失控”毁了条带

跑胶时电压、时间调错，条带要么跑太快糊了，要么跑太慢浪费时间。我以前总凭感觉设参数，结果跑出来的条带要么“宽得像面条”，要么“没跑够距离”，后来才摸清：跑胶参数得跟着样品“走”。

1. 电压匹配：小片段“快跑”，大片段“慢跑”

跑100-1000bp的PCR产物时，我以前用80V跑，结果跑了40分钟，条带还没到凝胶中间，浪费时间不说，条带还扩散了。张老师告诉我，小片段分子小，跑得快，得用高电压“催一催”。现在跑小片段，我用120-130V，25-30分钟就能跑到位，条带又细又亮；跑1kb以上的质粒或基因组DNA，就用80-100V慢慢跑，40-50分钟刚好，条带能分清楚超螺旋、线性和开环三种形态，不会糊在一起。

有次赶实验进度，跑5kb的质粒用了110V，结果条带跑成一团，只能重新准备样品，又花了2小时——真是欲速则不达。

2. 温度控制：别总开盖子，30℃是“安全线”

夏天跑胶时，我总忍不住开盖子看进度，结果胶槽里的温度忽高忽低，条带跑得歪歪扭扭。后来张老师让我在胶槽里放个温度计，跑胶时温度控制在30℃以内，超过这个温度，条带就容易扩散。现在我跑胶时，除非时间快到了，不然绝不轻易开盖子。要是室温超过30℃，我就在胶槽旁边放个冰袋（用毛巾裹住，别直接接触胶槽），上次这么做，温度稳定在28℃，条带比没放冰袋时整齐多了。

有次实验室空调坏了，我甚至把仪器搬到通风柜里跑胶，就为了保持温度稳定——细节做到位，条带才不会“闹脾气”。

四、收尾：别让“偷懒”影响下次实验

跑胶结束后别着急拆胶，做好这两步，不仅能保护仪器，还能让下次实验更顺利。

1. 拆胶顺序：先关电源再拔线，别带电操作

第一次拆胶时，我忘了关电源，手碰到电极差点触电，现在每次都先关电源，拔掉插头，再拆胶槽。拆胶时要轻，别用力掰胶槽的卡扣，不然卡扣容易断，下次灌胶会漏液。我以前有个胶槽就是因为拆得太用力，卡扣断了，灌一次漏一次，换个胶槽花了100多块，还耽误了实验。

现在拆胶槽，我会先把电极线拔下来，再轻轻掰开卡扣，动作慢一点，仪器能多用好几年。

2. 仪器清洁：每次用完擦一擦，电极不氧化

跑胶后胶槽里会有胶渣和缓冲液残留，不清理的话，电极容易氧化，下次跑胶电流会不稳。我每次拆完胶，都会用清水把胶槽冲干净，电极用软布擦一下，要是有盐结晶，就用10%的柠檬酸溶液泡5分钟，再冲干净。现在我的电泳仪用了3年，电极还是亮银色，电流波动从来没超过±2mA，比实验室里没清理过的仪器好用多了。

有次师妹忘了清洁，胶槽里的缓冲液干成了盐块，我用柠檬酸溶液泡了10分钟才擦掉——还是每次用完就清洁，省得后面麻烦。

结尾：细节不是“麻烦事”，是成功率的“保险”

以前总觉得电泳实验“难”，后来才发现，难的不是步骤，而是把每个细节做到位。灌胶时控制好温度，上样时选对工具，跑胶时调好参数，这些看起来不起眼的小事，其实是提升成功率的关键。

现在我带新手做实验，都会把这些细节教给他们，看着他们第一次就能跑出清晰条带，不用像我以前那样反复返工，特别有成就感。其实电泳实验就像做饭，火候、调料、手法都到位了，味道自然差不了——实验已经够累了，能少走点弯路，多省点时间，不是很好吗？

本文由北京六一生物编辑整理。

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