电泳实验常见问题深度解析与精准应对策略

作者：六一生物发布时间：2025-08-21 09:19:08 点击：

上周帮师妹处理电泳数据，看着她电脑里满屏“弥散条带”的照片，突然想起六年前刚进实验室的自己——第一次跑Western blot，预染Marker跑成了“歪歪扭扭的虚线”，熬了三个通宵提的蛋白样品全白费，躲在走廊里对着凝胶哭。后来跟着实验室的王老师一点点抠细节，从样品处理到仪器调试，记满了两本实验笔记，现在跑胶时哪怕条带出一点异常，我都能大概猜到问题在哪。今天就把这些带着“汗味”的实战经验写下来，每个问题都附了我当年踩坑的具体场景，比冷冰冰的操作手册实在多了。

一、条带“糊成一团雾”？我踩过的两个致命坑

刚开始做分子实验时，我总以为条带弥散是凝胶质量差，换了四种品牌的胶还是没改善。直到王老师盯着我处理样品的过程，才指出了两个我从来没注意过的问题。

1. 提RNA时忘了加酶抑制剂，样品全降解

第一次做RT-PCR后的电泳，条带模糊得像蒙了层纱，连Marker都看不清楚。我抱着凝胶去找王老师，她第一句话就是：“提取RNA时加RNase抑制剂了吗？”我这才猛然想起，那天赶实验，离心管里只加了裂解液，把抑制剂的事抛到了九霄云外。RNA在室温下特别容易降解，哪怕空气中的微量RNase，都能让RNA断成碎片，电泳时自然跑不出清晰条带。

后来我养成了“配试剂时念步骤”的习惯：提取RNA时，先在离心管里加1μL RNase抑制剂，再加裂解液，反复念三遍“抑制剂、裂解液、样品”，再也没忘过。上周师妹也犯了同样的错，按我说的方法补加抑制剂重新提取，跑出来的条带又细又亮，她激动得在实验室喊：“终于不是‘雾霾条带’了！”

2. 为了赶进度调高压，500bp片段跑成“宽面条”

研一那年赶开题报告，要跑一批500bp的PCR产物电泳。正常120V跑30分钟就行，我嫌慢，直接调到150V，还跟同学炫耀“我这速度比你们快20%”。结果跑出来的条带宽得能“盖住两个孔”，相邻的样品条带都连在了一起，根本没法分析。王老师看到后，把我叫到仪器前，指着凝胶槽里的缓冲液说：“你摸一下，是不是发烫？”我伸手一摸，缓冲液温温的，原来电压太高会让凝胶局部升温，DNA片段受热扩散，条带就“糊”了。

现在我桌上贴了张“电压对照表”：100-1000bp用120V，1-3kb用100V，3kb以上用80V，哪怕晚上加班到十点，也绝不随便调高压。有次实验室电压不稳，120V实际只有105V，我宁可多等5分钟，也没往上调——慢一点没关系，总比跑废样品强。

二、Marker“失踪”或“跑偏”？三个让我追悔莫及的瞬间

Marker是电泳的“标尺”，要是Marker出问题，连样品大小都没法判断。我曾因为Marker异常，白白浪费了三批珍贵的临床样本，现在想起来还心疼。

1. 预染Marker没煮，条带淡得像“幽灵”

第一次用预染蛋白Marker时，我直接从冰箱拿出来上样，跑出来的条带淡得几乎看不见，还以为是Marker过期了，找试剂商扯皮了半天。后来试剂商的技术支持问我：“你加热变性了吗？”我才翻出说明书，看到上面写着“95℃加热5分钟，冰浴冷却”——预染Marker里的蛋白质没变性会形成聚集体，根本跑不动，条带自然就淡。

现在我用预染Marker前，都会把离心管放在PCR仪里，设置95℃5分钟，再放到冰盒里降温。有次师妹嫌麻烦，说“少一步没关系”，结果跑出来的Marker条带缺了三条，只能重新煮了再跑，反而多花了20分钟。

2. 胶没凝好就插梳，梳孔裂了漏样品

研二那年做酶切实验，灌完胶才等了15分钟，我就急着插梳——手一用力，梳子直接歪了，我还强行把它掰正。上样时，Marker顺着梳孔的裂缝漏到了凝胶里，跑出来的条带歪得像“蛇形”，还少了两条带。王老师过来一看，指着梳孔边缘说：“你看这里，有个小裂缝，样品全漏了。”那天我重新灌胶、上样，多花了一个小时，晚饭都没吃上。

现在灌胶后，我会用手轻按胶面：感觉硬邦邦的，按下去不凹陷，才敢插梳。插的时候垂直往下，慢慢用力，绝不左右晃。要是发现梳孔有裂缝，我会用移液器吸一点融化的凝胶，滴在裂缝处补好，上次就这么救回了一板胶，不然又得浪费半小时。

3. 换胶时接反正负极，Marker跑“出界”

这是我最蠢的一次失误！有次换凝胶槽时，光顾着聊天，把红色正极线接在了负极接口上。跑了10分钟，我低头一看，Marker居然往反方向跑，都快跑出凝胶边缘了。我赶紧断电，手忙脚乱地换电极线，心脏砰砰跳——还好发现及时，Marker还能继续跑，只是位置有点偏。要是再晚5分钟，Marker就全跑没了，那批样品只能重新做。

现在我上样前，都会盯着电极线看三遍：红色接“+”，黑色接“-”，接好后再扯一下线，确保没松。还在电极线上贴了彩色标签：正极贴红色，负极贴黑色，再也没接过反。

三、仪器突然“罢工”？两次应急处理救了我的实验

电泳到一半仪器报错、断电，是最让人崩溃的事。我曾遇到过两次仪器故障，第一次手忙脚乱全搞砸，第二次却完美解决，关键就在“别慌”。

1. 夏天仪器“过热保护”，冰袋救了我的样品

去年夏天实验室空调坏了，室温飙到32℃。我跑Western blot到一半，仪器突然弹出“过热”提示，自动关机了。看着凝胶槽里的样品，我差点哭出来——这是我提了一周的蛋白，要是废了，下周的组会就没法汇报。王老师听到动静过来，说：“快拿冰袋！”我们用毛巾裹住冰袋，放在凝胶槽两侧，10分钟后仪器温度降下来，重新开机继续跑，最后条带居然完好无损。

现在夏天做电泳，我都会提前在冰箱冻两个冰袋，放在仪器旁边备用。有次隔壁实验室的仪器也过热了，借了我的冰袋才救回实验，他们还开玩笑说：“你这冰袋比空调还管用！”

2. 突然断电瞎重启，数据丢了白跑一趟

研一那年，实验室突然断电，我吓得赶紧拔插头，再开机时仪器显示“数据丢失”，只能重新跑胶。后来问了仪器工程师才知道，断电后应该先等5分钟，再开机——很多仪器会保存断电前的参数，直接重启反而会清除数据。

现在遇到断电，我都会坐在仪器前等5分钟，再慢慢开机。有次真的恢复了之前的参数，接着跑了20分钟就完成了实验，省了我不少事。我还在实验记录本上贴了张“断电处理步骤”，师妹们遇到断电，都会先翻我的本子看。

四、条带“拖尾”“缺条”？那些被审稿人指出的小问题

刚开始投稿时，审稿人总说我的电泳条带“质量差”，要么拖尾，要么缺条。我花了一个月琢磨，才解决这些“小问题”。

1. 上样量太多，梳孔堵了条带拖尾

有次为了让条带更亮，我把上样量从10μL加到20μL，结果条带拖了个“长尾巴”，还把梳孔堵了，后面的样品根本没法上。工程师告诉我，梳孔的容量只有15μL，上样量太多会溢出，电泳时样品没法完全分离，就会拖尾。

现在我都会先测样品浓度，浓度高就稀释，确保上样量不超过15μL。要是样品浓度低，就用真空浓缩仪浓缩，绝不多加一滴。上次投稿，审稿人还夸我的条带“清晰无拖尾”，我心里别提多开心了。

2. 凝胶没洗干净，残留染料让条带“模糊”

用SYBR Green染色时，我以前只洗一次凝胶，结果残留的染料附着在条带上，边缘模糊。审稿人让我“优化染色步骤”，我才开始用去离子水漂洗三次，每次5分钟，条带边缘立马变清晰。

有次师妹图省事，只洗了两次，跑出来的条带还是有点模糊，我让她再洗一次，结果清晰度提升了不少。她感慨说：“原来多洗一次差别这么大！”

结尾：实验的“坑”，都是成长的“梯”

现在看着自己跑出来的清晰条带，再想起当年那些“惨不忍睹”的凝胶照片，觉得特别有意思。其实电泳实验没有那么难，关键是要把每个细节做到位：样品处理多一步纯化，电压设置多一分谨慎，Marker准备多一次检查。

上个月带新进来的本科生做实验，她第一次跑胶就成功了，兴奋地说：“学姐，你教的方法太管用了！”我笑着说：“这些都是我摔过的跟头总结出来的。”科研路上没有捷径，那些踩过的坑，流过的汗，最后都会变成我们的经验。

希望这篇文章能帮大家少走一些弯路，毕竟做实验已经够累了，能在电泳上省点时间，就能把更多精力放在更重要的研究上——加油，我们都能跑出最清晰的条带！

本文由北京六一生物编辑整理。

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