DYCZ-40G 转膜那点事：我的参数笔记与翻车实录

作者：六一生物发布时间：2025-09-26 08:57:54 点击：

哎，DYCZ-40G这老伙计，搞蛋白的谁没用过？说实话，转膜条件这玩意儿，真没个绝对标准答案，都是试出来的。你问我怎么设？我第一反应就是：别用恒压，用恒流（Constant Current, CA）。为啥？省心啊！电阻变了电流不变，粒子咔咔往外跑，劲儿使的匀乎。我一般就定在250mA，这是个万金油的数，不大不小，然后定时一个半小时。你先按这个来，大概率不会出啥大笑话。

分子量大小？那得看菜下饭！

这东西可不能一刀切。对付那些小蛋白（小过50kD的），跟哄小孩儿似的，你得快准狠。我习惯用250mA，但时间掐死在60分钟。完事儿就得赶紧打住，不然这帮小家伙劲儿大，咻一下全冲过膜了，你最后曝光一看，嘿，白忙活！
反过来，折腾那些上百kD的大块头，那就得有点耐心了，得像熬汤。我把电流降到200mA，但时间直接拉满到俩小时，有时甚至更长。你得给它时间慢慢悠悠地从胶里蛄蛹出来，钻进膜里。心急真吃不了热豆腐，转不干净你哭都找不着调。

最重要的一件事：冰浴！冰浴！冰浴！

这破玩意儿巨烫！巨烫！巨烫！重要的事说三遍。我跟你讲我干过的蠢事：有一回半夜做实验，困迷糊了，忘了加冰袋，直接给我煮了一锅“蛋白质浓汤”。好家伙，摸一下槽子差点给我手烫秃噜皮。结果呢？背景花的没法看，条带全弥散了，样本直接废了。现在我可长记性了，必须里三层外三层地给它用冰包上，冰桶里冰水混合物伺候着。你电流一大，发热就是爹，散热不行全都白扯。

“三明治”可不是随便夹的

夹“汉堡包”（转膜夹）可是个手艺活。海绵、滤纸、胶、膜，每层都得用玻璃棒仔仔细细地滚，把气泡全赶出去。有一个小气泡，那里就是一片空白，悔死你。我还有个私人土方子：对付特别大的蛋白，我会在转膜液里偷偷加一丢丢SDS（比如0.01%），让它滑溜点，好出来。但加多了可就挂不住膜了，这分寸自己把握。小蛋白我可不敢加，怕它窜稀。

最后咋知道成没成？看marker！

设好参数屁股一撅就走人了？那可不行。我每次都必须用预染的蛋白Marker，这玩意儿就是我的眼睛。转完了我第一时间不是去看膜，是先瞅一眼Marker是不是都均匀地趴到膜上了，大小对不对得上。完事儿再把剩下的胶捞出来，扔考马斯亮蓝里快速染它五分钟。要是胶上都白了，说明转得挺干净；要是还有深深的印子，得，下次接着调整吧，要么加时间，要么加电流。这些事后验证的步骤，比啥说明书都管用，能让你心里真有底。

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