DYCZ-40D 转膜条件怎么设？老师傅的压箱底笔记

作者：六一生物发布时间：2025-09-29 08:53:47 点击：

别整那些花里胡哨的，记住一个核心原则：用恒流（Constant Current, CA），别用恒压（CV）。恒流稳当，电阻变了它电流不变，分子被推着跑的劲儿是匀的。我们实验室的万能起手式是：总电流设定在 200 mA。这是个非常稳妥的数值，既能保证效率，又不至于让发热一下子变得太离谱。时间先预设90分钟。你先按这个来，大概率能成，但想追求完美，还得往下看。

1、小蛋白（＜50 kDa）：你得跟它“快打旋风”

对付这些小个子，它们溜得快。我的策略是：电流加大到 250 mA，但时间必须缩短到 45-60 分钟。你得用快准狠的劲头把它“推”过去。时间一旦拉长，它们很可能就直接冲过膜了，结果你曝光一看，膜上干干净净，蛋白全跑滤纸上了，让你欲哭无泪。这时候，宁短勿长。

2、中大蛋白（50-100 kDa）：这是最省心的“老实人”

这个范围的蛋白是最好伺候的，也是大部分抗体针对的靶点。你就用咱们刚才说的200mA，跑 75-90 分钟，效果通常都非常稳定。电流和时间的这个搭配，对它来说就是“黄金组合”，跑出来的条带又锐利又均匀。这是我们最常用的参数，几乎不用动脑子。

3、大蛋白/超大蛋白（＞100 kDa）：你得有“熬鹰”的耐心

这些是大爷，得哄着来。你劲儿给大了，它不但出不来，还可能在你胶里就变性了。所以必须降电流、延时间。我一般把电流降到 150-170 mA，但时间直接拉满到 120分钟，甚至更长。你得给它足够的时间，让它慢慢悠悠、完整地从胶里“蠕”动到膜上。心急吃不了热豆腐，转不彻底才是最大的浪费。记住，对付大蛋白，冷却是重中之重，下面会细说。

4、“冰”是转膜的命！没有之一！

不管你设什么参数，冰浴必须到位！DYCZ-40D这机器一跑起来就是个电炉子，发热巨严重！高温会导致蛋白质变性、缓冲液蒸发、背景一塌糊涂。我们的标准操作是：找一个比转膜槽大两圈的塑料盆，槽放进去后，在四周塞满用50mL离心管自制的冰柱（比买的冰袋贴得更紧），然后往盆里狂加冰水混合物，水位必须没过槽内的缓冲液液面！你要让转膜槽始终处于冰水包围之中。别偷懒，不然你设的任何参数都是白搭。

5、最后怎么验证？看Marker！

跑完后，别直接把膜扔了孵抗体。先把那张预染蛋白Marker膜拿出来看一眼。如果不同大小的条带都清晰、均匀地转上去了，说明你这次参数设对了。如果小分子量的转了，大分子量的没转，下次你就得为大的增加时间或调整冷却。这叫“用结果倒推参数”，比死记硬背更管用。

由北京六一生物编辑整理。

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