DYCP-36型等电聚焦电泳槽：一份来自实验室的“生存指南”

作者：六一生物发布时间：2025-10-10 09:05:19 点击：

DYCP-36型等电聚焦电泳槽：一份来自实验室的“生存指南”

第一步：“灌胶”不是灌，是“请君入瓮”

说明书会让你按配方配胶，然后灌进玻璃管里。但它绝不会告诉你，直接倒着灌，十有八九会引入气泡，这根管子就废了。我们的祖传秘方是：用一个10mL注射器（去掉针头），吸满胶液，排空空气。把注射器嘴紧紧抵在玻璃管底部，像打针一样，非常缓慢、匀速地推动活塞，让胶液从管底向上慢慢“顶”满整个管子。这样，气泡会被液面自然推到顶端排出。所有管子灌好后，用微量移液器在每管顶部轻轻加一层水封液。这个手法，是保证胶均匀平整无气泡的核心，新手练两次就能出师。

“脱水”是隐形杀手，说明书可不会提醒你

配方里动不动就8M尿素，是为了解开蛋白的折叠。但尿素这东西极其狡猾，非常容易从空气中吸水潮解，或者低温下析出微小结晶。你看着是澄清的，灌胶时可能就堵了或者出现怪异的条纹。我们的土办法是：配好的胶液，必须用0.45微米的滤膜过滤一下！这一步能滤掉那些看不见的晶核和杂质，极大提高成功率。虽然多了个步骤，但能避免你整块胶报废，这才是真正的效率。过滤后，马上分装冷冻，下次用一管取一管。

上样：不是越多越好，而是越“准”越好

说明书只会给你一个上样量的范围。但老手才知道，IEF对盐离子浓度敏感得要命。如果你的样品盐浓度太高（比如没脱好盐的血清），通电后会产生巨大的初始电流，发热严重，甚至会把蛋白烧坏在加样位置，形成一条垂直的“热点”条纹。所以，样品必须用超纯水或低盐缓冲液充分透析或脱盐。上样量不是死数，对于复杂样品，宁少勿多。我们习惯先做个预实验，从20μg开始试，找到最佳信号且条带不拖尾的量。

聚焦过程：你得守着它，当“ICU护士”

通了电，你屁股就别想离开凳子。IEF不是跑SDS-PAGE，设定好时间就可以去喝咖啡了。你要像个护士一样时刻监护它的“生命体征”：

1. 看电压：电压会从一开始的较低值，随着聚焦完成逐渐攀升到最后设定的高电压（如1000V）。如果电压卡住不动了，说明有短路或者样品盐分太高。
2. 摸槽壁：必须时刻感受温度！这玩意儿跑起来发热巨大。我们实验室标配：一个大号塑料盆，里面装满冰水混合物，把整个电泳槽坐进去，四周再塞满冰袋。散热不行，一切白搭。
3. 听声音：刚开始电流大，会有轻微的“嘶嘶”声，这是正常的。如果声音变得异常或者突然没了，赶紧检查。

取胶：最考验耐心和手感的“盲操作”

聚焦完了，取胶才是终极挑战。说明书就一句话：用注射器推水压出胶条。但它没告诉你，推得太猛，又滑又嫩的胶条会“嗖”地一下射出去，掉地上或者摔碎。我们的技巧是：推水时，另一只手的手指要轻轻地、似触非触地抵在玻璃管口，感觉到胶条的头刚冒出来，就立刻用镊子轻轻夹住，一边缓缓推水，一边顺势把它“请”出来。整个过程要温柔，感觉胶条在和你的手配合。取出的胶条立刻进行平衡或固定，防止扩散。

总之，DYCP-36的说明书教你的是“操作”，而我们积累的经验教你的是如何与仪器“对话”。它是一台需要被理解和尊重的精密设备，当你摸清它的脾气，它回报给你的将是无比清晰的蛋白质图谱。

本文由北京六一生物编辑整理。

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