DYCZ-40G转膜条件怎么设？老手都是这么折腾的

作者：六一生物发布时间：2025-10-14 09:03:09 点击：

说实话，第一次用DYCZ-40G转膜，看见那堆参数头都大。什么恒流恒压，什么时间电流，后来才明白，核心就认准“恒流（CA）”模式。为啥？这玩意儿稳当。转膜过程中电阻会变，恒流能保证蛋白被一股匀乎的劲儿推着走，不容易出幺蛾子。你要是用恒压，劲儿时大时小，结果可就说不准了。

但恒流有个大坑：发热巨严重！你设的电流越大，它就越像个热得快。所以甭管你参数设得多完美，要是忘了冰浴，一切全完蛋。我们的标准操作是找个比转膜槽大两圈的泡沫箱，里面塞满冰袋，再倒上冰水混合物，必须把整个槽子淹住才行。你用手摸槽壁，感觉温乎就危险了，必须拔凉拔凉的才行。

1、小蛋白（＜50 kDa）这玩意儿跑得快，但你得跟它比速度。

它溜得快，但也容易“跑过头”——直接从膜里钻出去，结果你啥也检测不到。所以我们的策略是高压快攻：电流直接给到250 mA，但时间严格掐死在45分钟到1小时之内，到点就关电源，多一秒都不等。这就好比捞小鱼，网子得快进快出。

2、中等大小的蛋白（50-100 kDa）是最省心的，也是平时碰见最多的。

这类蛋白没那么矫情，给够时间和劲儿就行。我们实验室最常用的万能参数是200到220 mA，跑个一个半小时左右。这个条件下来，大部分蛋白都能老老实实转到膜上，条带也漂亮。你要是没谱，先从这儿开始试，一般错不了。

3、最难搞的是那些大块头（＞100 kDa），你得有哄孩子的耐心。

它自己在胶里挪动就费劲，你电流给大了，它还没动地方呢，热量先把它给烫变性了。所以对付它们，必须降电流、延时间。电流降到160 mA左右，时间拉长到俩小时，甚至更长。你得给它足够的时间慢慢悠悠地爬出来。这时候冰浴就更重要了，得保证全程低温。有时候跑完了看胶没转干净，下次还得再加时间。

除了参数，“三明治”要夹得紧才是真的。每层滤纸、胶和膜之间都不能有气泡，有个小气泡的地方就会有个白点。我们都用玻璃棒仔仔细细滚好几遍。另外，缓冲液里的甲醇不能省，它能帮着蛋白和膜贴得更紧。

总之，转膜就是个经验活，别人的参数都是参考。你得根据自己的蛋白和设备慢慢调。最重要的就是冰浴冰浴冰浴，再说三遍。

本文由北京六一生物编辑整理。

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