DYCP-40E半干转印操作全流程：从滤纸浸润到转印完成的分步详解

作者：六一生物发布时间：2025-10-15 09:09:11 点击：

DYCP-40E半干转印系统的优势在于快速高效，但其成功率高度依赖于操作的精确性与细节把控。一个微小的失误就可能导致转印失败。以下流程将引导您完成从准备到结束的每一个关键步骤。

第一步：核心准备——“三明治”组分的精确裁切与活化

这是整个流程中最关键的准备环节，其精度直接决定了电流通路的均匀性。

1、滤纸裁切：取足够数量的厚滤纸（Whatman 3MM或等效品），用干净剪刀或刀片精确裁切成与您的凝胶完全相同的尺寸。通常需要准备6张滤纸（阴极侧3张，阳极侧3张）。务必确保所有滤纸边缘对齐，任何突出的边缘都会导致电流分布不均，造成转印条带扭曲。

2、膜的处理：裁切PVDF膜至与凝胶相同尺寸。将膜在无水甲醇中完全浸没浸泡约15秒进行活化，使其由疏水性变为亲水性。随后，将其转移至转印缓冲液中平衡。注意：若使用NC膜，则无需甲醇活化，直接浸入转印缓冲液即可。

3、凝胶准备：电泳结束后，小心撬开玻璃板，取出SDS-PAGE凝胶，根据大小需求进行修整，并置于转印缓冲液中短暂平衡。

第二步：缓冲液浸润——构建均匀的离子通路

半干转印无需大量缓冲液，其核心在于让滤纸和膜充分且均匀地吸附缓冲液。

1、滤纸浸润：将裁切好的滤纸完全浸入盛有转印缓冲液的平皿中，确保其完全湿透且无任何气泡附着。可用玻璃棒轻轻搅动或轻压滤纸以驱赶气泡。取出后，稍沥干，避免过分流淌。

2、膜与凝胶：保持膜和凝胶始终浸没在缓冲液中，避免干燥。

第三步：“三明治”堆叠——精准对齐与绝对排泡

此步骤是技术的核心，需要耐心和细致的操作。

1. 铺设阳极侧基底：将3张浸润好的滤纸整齐地叠放在阳极（+）碳板的正中央。每放一张，都用一支干净的玻璃试管缓缓滚压，彻底排除滤纸与碳板之间、以及滤纸层与层之间的所有气泡。
2. 放置转印膜：用平头镊子将活化好的PVDF膜精准地铺在滤纸堆的中央。同样，用玻璃管仔细滚压膜表面，确保其与下层滤纸紧密贴合，无任何气泡。任何微小气泡都会阻断该区域的蛋白转印，导致膜上出现空白点。
3. 放置凝胶：将平衡好的凝胶精确地铺在PVDF膜上。一旦放下，切勿再移动，否则会导致条带扭曲变形。再次用玻璃管滚压凝胶，排除所有气泡。
4. 完成堆叠：将另外3张浸润的滤纸对齐后叠放在凝胶上方，构成阴极（-）侧。同样进行彻底滚压排气。
5. 最终检查：堆叠完成后，从侧面观察整个“三明治”是否各层完全对齐。若有任何层错位，应揭开上层滤纸重新调整。

第四步：上机运行——参数设置与热管理

1. 合盖与设置：小心地将上层电极板（阴极）盖上，确保其平稳下落，压紧整个“三明治”结构。连接电源，根据目标蛋白分子量设置转印参数。常规条件为：恒定电流，按凝胶面积计算（如1-2 mA/cm²），转印时间15-45分钟。分子量越大，所需时间越长，但电流不宜过高，以免产热过多。
2. 热管理：半干转印虽产热少于湿转，但仍不可忽视。确保实验环境通风良好，必要时可在仪器旁放置冰袋辅助散热。

第五步：转印后处理——膜的标记与检测

转印完成后，务必先断开电源，再打开仪器。

1. 取出与标记：小心取出转印膜。此时蛋白已结合在膜上。可用软铅笔在膜边缘标记实验信息及分子量标准位置。
2. 染色验证（可选但推荐）：将膜投入丽春红S染液中染色1-2分钟，然后用水快速脱色。此步骤可直观地确认蛋白是否已成功转印至膜上，并检查转印的均匀性。
3. 进入下步：脱色后，即可进行后续的封闭、一抗二抗孵育及化学发光检测等步骤。

遵循以上详尽的步骤，严格控制每个细节，将能极大提升您使用DYCP-40E进行半干转印的成功率与重复性。

本文由北京六一生物编辑整理。

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