DYY-6C做DNA电泳应该设置多少伏，跑多久？

作者：六一生物发布时间：2025-10-16 09:12:23 点击：

在分子生物学实验室中，使用DYY-6C型双稳定时电泳仪电源进行DNA琼脂糖凝胶电泳是一项基础却至关重要的实验。很多实验人员，尤其是初学者，最常遇到的困惑就是：“这次实验到底应该设置多少电压，跑多长时间最合适？” 这个问题的答案并非一个固定的数字，而是一个基于科学原理的灵活选择。本文将深入探讨其设定原则，为您提供一个清晰、可靠的决策框架。

一、核心原理：电压、凝胶长度与迁移时间的三角关系

理解参数设定的核心，在于掌握一个关键公式：电场强度 = 电压 / 电极间距离（凝胶长度）。单位是伏特每厘米（V/cm）。

电场强度（V/cm）直接决定了DNA片段在凝胶中的迁移速率。电场强度越高，DNA跑得越快，所需时间越短；反之则越慢，时间越长。

您设置的总电压（V），必须结合您所使用的电泳槽的两极之间凝胶的实际长度（cm）来综合考虑。

因此，抛开凝胶长度直接谈论电压是没有意义的。专业的讨论都是以“电场强度”作为基准。

二、如何计算并设定DYY-6C的电压？

第一步：测量您的凝胶长度

取下电泳槽的盖子，用尺子直接测量正负两极之间凝胶的直线距离（单位：厘米）。这是一个常常被忽略但极其关键的步骤。常见的小型垂直电泳槽此距离约为5-8cm，而较长的水平电泳槽可能达到10-15cm甚至更长。

第二步：根据目标电场强度计算电压

对于常规的DNA琼脂糖凝胶电泳，推荐的电场强度范围通常在 5 - 10 V/cm 之间。

计算公式：设定电压 (V) = 目标电场强度 (V/cm) × 凝胶长度 (cm)

举例：如果您的凝胶长度为10cm，您决定采用8 V/cm的电场强度。

那么您的DYY-6C电源就应该设置为：8 V/cm × 10 cm = 80 V。

第三步：在DYY-6C上进行设置

1. 接通电源，将输出导线正确连接至电泳槽（红正黑负）。
2. 按下 “设定/工作” 键进入设定模式。
3. 按 “电压/电流”选择键，确保“电压”指示灯亮起。
4. 旋转旋钮，将电压值调整至计算出的数值（如80V）。
5. 再次按下 “设定/工作” 键，仪器开始工作在恒压模式。

三、如何判断电泳时间？观察指示剂是关键

电泳所需时间与电压设定呈负相关，但无法通过公式精确计算。最可靠的判断依据是观察凝胶中的示踪染料（如溴酚蓝或二甲苯青）。

1、溴酚蓝：约相当于300-500 bp的DNA片段的迁移位置。

2、二甲苯青：约相当于2000-4000 bp的DNA片段的迁移位置。

3、通用策略：当所需观察的DNA片段大小与染料指示的片段大小接近时，应在该染料条带迁移至凝胶全长约2/3至3/4处停止电泳。对于大多数旨在快速检查PCR产物的实验，溴酚蓝迁移出凝胶即可停止。

4、时间范围参考：在5-10 V/cm的电场强度下，小琼脂糖凝胶的电泳时间通常在20分钟到1.5小时之间。电压偏高（如10V/cm）则时间缩短（约20-45分钟），电压偏低（如5V/cm）则时间延长（约1-1.5小时），以获得更好的条带分离度。

四、高级技巧与注意事项

1、追求分辨率 vs. 追求速度：您需要在条带分离度（分辨率）和实验时间之间做出权衡。较低的电压（如5 V/cm）运行更长时间，可以减少扩散效应，使条带更锐利，分离效果更好，尤其适用于区分大小相近的DNA片段。较高的电压则用于快速验证，但可能降低分辨率。

2、注意缓冲液状态：使用新鲜配制的TAE或TBE缓冲液。重复使用多次的缓冲液离子强度会下降，导致电阻增大，在相同电压下电流会减小，迁移速率变慢。

3、监控电流值：在恒压模式下，DYY-6C显示的电流值可用于监控系统状态。如果电流异常低，可能是缓冲液浓度不足或导线接触不良；如果电流异常高甚至报警，则可能发生了短路。

4、使用定时功能：根据经验预估时间后，强烈建议使用DYY-6C的定时功能。设定好时间，仪器会自动停止运行，非常适合在无人值守时避免电泳过度。

五、总结：为DYY-6C电泳仪电源设置参数，绝非死记硬背一个电压值。正确的流程是：

1. 测量您的凝胶长度（单位：cm）。
2. 计算：根据目标分辨率，在5-10 V/cm范围内选择一个电场强度，乘以长度得到设定电压。
3. 设定：将DYY-6C设置为恒压模式，输入计算出的电压值。
4. 观察：以溴酚蓝等示踪染料的迁移位置作为停止电泳的主要依据，时间作为辅助参考。

通过理解并应用这一原则，您将能游刃有余地应对各种DNA电泳实验，获得清晰可靠的结果，彻底告别盲目尝试。

本文由北京六一生物编辑整理。

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