DYCZ-40A垂直电泳槽完全操作指南：精通Western Blot核心第一步

作者：六一生物发布时间：2025-10-22 09:10:13 点击：

DYCZ-40A型垂直电泳槽提供了一份从入门到精通的标准化操作规程。内容涵盖其独特设计（如更长凝胶板、更高电压耐受性）、详尽的组装与电泳步骤、针对蛋白质分子量优化分离胶的秘诀，以及至关重要的安全注意事项。本文特别聚焦于如何利用DYCZ-40A获得更优的蛋白分离效果，为高质量的Western Blot结果奠定坚实基础。

一、 DYCZ-40A简介：不仅仅是“更大的DYCZ-30C”

DYCZ-40A是一款经典的双板夹芯式垂直电泳槽，常被视为DYCZ-30C的升级或大通量版本。然而，理解其独特之处是正确操作的第一步。

核心特点：

1. 更大的凝胶尺寸：其玻璃板通常比30C型号更长，提供了更长的分离距离，从而能实现更高的分辨率，尤其有利于分离分子量非常接近的蛋白质。
2. 更高的电压/电流耐受性：设计上允许在更高电压下运行，可缩短电泳时间。
3. 为转印优化：其设计常与湿式或半干式转印系统配套，是完整的Western Blot工作流中的核心一环。

正确操作DYCZ-40A，不仅能获得漂亮的电泳图谱，更是后续转印、显影成功的关键。任何在电泳阶段引入的问题，在后续步骤中都将被放大且无法弥补。

二、实验前的精密准备：成功的基石

安全警示：丙烯酰胺单体是强神经毒素，操作时必须佩戴手套、口罩，并在通风橱内配制液体。

1. 仪器与试剂清点：

DYCZ-40A主机：包括下槽、上槽、电极、弹簧夹。

玻璃板组件：确认包含短板和带凹槽的厚板。新板到手，请立即用记号笔标记配对，避免混用。

垫片与梳子：根据上样量需求选择合适厚度的垫片和齿数的梳子。

试剂：30%丙烯酰胺母液、Tris-HCl缓冲液（分离胶与浓缩胶用）、10% SDS、10%过硫酸铵、TEMED、SDS-PAGE电泳缓冲液、蛋白样品、预染蛋白Marker。

2. 关键试剂配制（示例为最常用的SDS-PAGE）：

分离胶缓冲液：1.5 M Tris-HCl, pH 8.8。

浓缩胶缓冲液：0.5 M Tris-HCl, pH 6.8。

电泳缓冲液：含SDS的Tris-甘氨酸缓冲液。

重要原则：所有试剂建议用超纯水配制，并使用pH计精确校准pH值，这是保证凝胶聚合质量和电泳条带平整度的前提。

三、标准操作规程：一步步走向完美条带

步骤一：玻璃板“三明治”的完美组装（杜绝漏液）

1. 清洁：用温和洗涤剂和清水彻底清洗玻璃板与垫片，蒸馏水冲洗后晾干或用无水乙醇擦拭。确保无任何残留。
2. 摆放：将厚板（带凹槽）平放，凹槽朝上。将两条垫片精准对齐厚板长边。
3. 覆盖：将短板光滑面朝下，小心覆盖在垫片上。
4. 夹紧：将组合体垂直插入电泳槽底座卡槽，用弹簧夹在两侧垂直向下用力夹紧。技巧：夹紧后对光检查，确保垫片被均匀压缩，玻璃板无错位。

步骤二：凝胶灌注——艺术与科学的结合

1. 配制分离胶：根据目标蛋白分子量选择最佳浓度（见下文表格）。在锥形瓶中按顺序混合各组分（水、缓冲液、丙烯酰胺、SDS），最后加入TEMED和APS，迅速旋涡混匀。
2. 灌胶：立即用移液器或沿短板边缘缓慢注入分离胶，至适当高度（通常距短板顶部约2.5-3厘米）。
3. 封胶：轻轻在分离胶上覆盖一层无水乙醇或水饱和异丁醇，压平胶面并隔绝氧气。静置20-30分钟至凝固（可见清晰折光线）。
4. 配制与灌注浓缩胶：倒掉上层醇液，用滤纸吸干。配制浓缩胶，灌满剩余空间。
5. 插入梳子：将梳子倾斜着平稳插入，避免气泡。静置凝固。

步骤三：电泳槽组装、上样与运行

1. 组装：凝胶凝固后，拔梳。将玻璃板组件卡入上槽，确保厚板凹槽与上槽密封圈紧密结合。将整套上槽放入盛有电泳缓冲液的下槽中。
2. 加样：用微量加样器吸取样品和Marker，枪头伸入加样孔底部，缓慢推出。样品因密度大会沉入孔底。
3. 连接电极：上槽接负极（黑色），下槽接正极（红色）。SDS使蛋白带负电，向正极迁移。
4. 设置参数与运行：

浓缩阶段：恒压80-100V，待溴酚蓝指示剂成一条细线。

分离阶段：转为恒压120-150V（可根据冷却条件调整），待溴酚蓝迁移至凝胶底部约0.5-1厘米时停止。

五、关键注意事项与高级故障排除

1. 温度控制是关键：DYCZ-40A在较高电压下运行时产热显著。建议在冷房或使用循环水冷却装置中进行电泳，防止“微笑”条带（两边快中间慢）和蛋白热变性。
2. “微笑”条带：除温度高外，还可能因凝胶聚合不均匀、电极不平行导致。确保灌胶后静置充分，检查电极。
3. “皱眉”条带（中间快两边慢）：通常因玻璃板中部存在间隙，导致局部电流过大。检查垫片是否平整，夹紧力是否足够。
4. 条带扩散/拖尾：上样量过大；样品盐浓度过高；凝胶聚合不良。减少上样量或对样品进行脱盐处理。
5. 蛋白条带连成一线：分离胶浓度选择不当；电泳时间过长，小分子蛋白已跑出凝胶。

六、实验后处理：为下一次实验负责

1. 关闭电源，拔电极。
2. 拆卸与取胶：取出玻璃板组件，用塑料楔子小心撬开，将凝胶移至转膜缓冲液或染色盒中。
3. 彻底清洁：立即清洗所有部件，特别是玻璃板夹缝中的凝胶残留。用温和洗涤剂和软海绵清洗，蒸馏水冲净，晾干备用。严禁硬物刮擦。

七、结语

熟练掌握DYCZ-40A垂直电泳槽的操作，是获得高质量Western Blot结果的基石。这套系统虽然经典，但对操作者的细心和理论理解要求很高。通过遵循本文的标准化流程，深入理解每个步骤背后的原理，并严格注意安全细节，您将能稳定、可重复地完成蛋白分离步骤，为您的科学研究提供可靠的数据支撑。请将规范操作变为习惯，让完美的电泳条带成为您实验的常态。

本文由北京六一生物编辑整理。

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