DYCZ-25D双垂直电泳仪标准操作规程

作者：六一生物发布时间：2025-10-23 09:21:22 点击：

本文提供DYCZ-25D双垂直电泳仪的完整标准操作规程，涵盖实验准备、设备组装、凝胶配制、电泳参数设置、拆卸清洗等全流程。通过详细的步骤分解、关键要点说明和故障预防措施，确保操作人员能够规范、安全地使用设备，获得稳定可靠的实验结果。

一、仪器概述与实验原理

1.1 设备简介

DYCZ-25D双垂直电泳仪是一种常用于蛋白质分离分析的实验室设备，其核心特点是可同时运行两块凝胶，显著提高实验效率。设备主要由电泳槽主体、玻璃板组件、电极和电源适配系统组成。

1.2 工作原理

基于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）原理：
SDS使蛋白质带负电荷，掩盖形状差异

聚丙烯酰胺凝胶形成分子筛效应

电场作用下蛋白质按分子量大小分离

二、实验前准备

2.1 试剂准备

分离胶配制体系（以10%为例）：

30%丙烯酰胺混合液 3.3 mL

1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 2.5 mL

10% SDS 0.1 mL

10%过硫酸铵 0.1 mL

TEMED 0.004 mL

去离子水 3.0 mL

浓缩胶配制体系（5%）：

30%丙烯酰胺混合液 0.67 mL

1.0 M Tris-HCl (pH6.8) 0.5 mL

10% SDS 0.04 mL

10%过硫酸铵 0.04 mL

TEMED 0.004 mL

去离子水 2.7 mL

2.2 设备检查清单

玻璃板无裂纹、无残留凝胶

垫片平整无变形

梳子齿完整无缺损

电极丝无断裂氧化

电源线连接可靠

三、标准操作流程

3.1 玻璃板组装（关键步骤）

1. 清洁处理：用乙醇棉片擦拭玻璃板
2. 垫片放置：将垫片精确对齐厚板边缘
3. 短板覆盖：光滑面朝下平放在垫片上
4. 夹具固定：使用对角线交替紧固法

3.2 凝胶灌注技术

分离胶灌注：

1. 沿短板边缘缓慢注入分离胶
2. 液面距短板顶部1.5 cm处停止
3. 立即用无水乙醇封层
4. 聚合时间：室温20-30分钟

浓缩胶灌注：

1. 倒去封层液体
2. 滤纸吸干残留液滴
3. 注入浓缩胶至完全充满
4. 倾斜插入梳子避免气泡

3.3 电泳槽组装
1. 拔除梳子检查加样孔
2. 将凝胶板卡入上槽槽位
3. 安装到盛有缓冲液的下槽
4. 检查液面是否超过电极丝

3.4 电泳参数设置

标准运行条件：

浓缩阶段：80 V恒压（约30分钟）

分离阶段：120 V恒压（约60-90分钟）

最大电流：≤50 mA/块凝胶

温度控制：4-10℃水浴冷却

四、关键操作要点

4.1 防漏液措施

1. 玻璃板必须绝对洁净干燥
2. 垫片与玻璃板边缘精确对齐
3. 夹具压力均匀分布
4. 首次使用前进行水密性测试

4.2 气泡预防方案

1. 灌胶时沿单一方向缓慢注入
2. 插入梳子时保持30°倾斜角
3. 出现气泡可用细针头引导排除
4. 浓缩胶凝固前避免振动台面

六、实验后处理

6.1 设备拆卸流程

1. 关闭电源拔掉电极
2. 取出凝胶板组件
3. 用塑料楔子撬开玻璃板
4. 凝胶转移至染色盒

6.2 清洗保养规范

1. 立即用温水和中性洗涤剂清洗
2. 顽固污渍用1% SDS溶液浸泡
3. 去离子水冲洗三次
4. 室温晾干后分开存放

七、常见问题解决方案

7.1 凝胶聚合异常

现象：凝胶不凝固或凝固不均

原因：AP或TEMED失效

解决：使用新鲜配制试剂

7.2 条带畸变分析

微笑条带：冷却不足，降低电压

皱眉条带：玻璃板底部污染，彻底清洁

条带弯曲：电极不平衡，检查电极丝

八、安全注意事项

8.1 化学品安全

丙烯酰胺操作需戴双层手套

配制试剂在通风橱内进行

废弃凝胶按危险废物处理

8.2 电气安全

湿手禁止操作电源

先接导线再通电

出现漏电立即断电

九、维护保养计划

日常维护

每次使用后彻底清洁

检查橡胶密封件弹性

记录设备使用情况

定期保养

每月：电极去氧化处理

每季度：全面性能检查

每年：专业校准检测

通过遵循本规程，您可以确保DYCZ-25D电泳仪始终处于最佳工作状态。建议将本规程制作成实验室标准操作文件，并对所有操作人员进行系统培训。任何偏离本规程的操作都应记录并评估风险。

本文由北京六一生物编辑整理。

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