DYCZ-20F测序电泳仪操作避坑全攻略：从手忙脚乱到一次点亮清晰序列

作者：六一生物发布时间：2025-11-27 09:05:47 点击：

第一次接触DYCZ-20F进行手工测序，面对灌制超薄变性胶的挑战，你是否感到无从下手？本文记录了我从无数次“跑胶失败”中总结出的全流程实战经验，带你一步步攻克灌胶、防气泡、点样等难关，最终获得一张背景干净、条带清晰的测序图谱。

手工测序是分子生物学的一项基本功，而DYCZ-20F是实现这一技术的经典装备。但它的操作难度，远高于普通的琼脂糖水平电泳。我曾因灌胶失败浪费过珍贵的测序产物，也因点样不当得到过无法解读的“鬼画符”。如今，我终于能稳定地跑出高质量序列，这份攻略就是你的捷径。

第一阶段：万全的准备——成功的一半

1. 极致洁净：这是测序电泳的铁律。玻璃板、 spacers、梳子必须用无水乙醇和亲和硅烷/剥离硅烷严格处理。我的血泪教训：曾因一块有微量残留的玻璃板，导致整块胶在电泳中途撕裂，样品全部报废。现在，我清洗后一定会戴着手套操作，防止指纹污染。
2. 精密组装： DYCZ-20F的玻璃板更薄，对对齐精度要求极高。将玻璃板与 spacers 对齐后，用夹子从两侧和底部牢固夹紧。我的必检步骤：组装好后，我会加入少量去离子水测试是否泄漏。这五分钟的测试，能避免后续半小时的灌胶工作功亏一篑。

第二阶段：灌制变性胶——与时间赛跑的艺术

配制胶液：根据读长需要配制6%或8%的聚丙烯酰胺-尿素凝胶。尿素是变性关键，但极易析出。我的技巧：使用超纯水配制，并在加热溶解时确保溶液完全清澈透明。
关键时刻：当加入TEMED后，聚合反应立即开始。你必须动作迅速、精准。
灌胶手法（防气泡核心）：

1. 将组装好的玻璃板装置倾斜约60度。
2. 用一个50mL注射器（去除针头）吸取胶液，沿着一侧玻璃板的缝隙，以稳定、连续的液流缓缓注入。诀窍：让胶液依靠重力自然流下并充满整个空间，这是避免引入气泡的唯一方法。
3. 当胶液流到底部并充满后，轻轻将装置放平。
插入鲨鱼齿梳子：立即插入鲨鱼齿梳子，齿尖刚好接触到凝胶表面即可，切勿插入过深。然后用夹子固定，静置聚合1-2小时。

“翻车”现场复盘：

案例：胶内有气泡。
原因：灌胶液流中断或速度不均。
解决：如果气泡在非上样区域，可忽略；若在关键区域，尝试在凝胶未完全凝固时，轻轻敲打玻璃板引导气泡上升。最稳妥的办法是：重新灌制。
案例：预电泳时电流上不去或条带扭曲。
原因：缓冲液浓度不对、尿素析出堵塞凝胶孔径，或玻璃板不干净。
解决：确保使用新鲜的1x TBE缓冲液；检查胶液是否完全溶解；严格清洗玻璃板。

第三阶段：上样与电泳——稳中求胜

1. 预电泳：安装好电泳槽，加入缓冲液后，必须进行预电泳（例如2000V，30分钟）。这一步能加热凝胶至适宜温度（约50℃），并驱除凝胶中的杂质离子，是获得低背景、高信噪比结果的关键。
2. 点样：这是最考验手艺的一步。将变性后的测序产物加热，然后立即置于冰上。

用超薄上样枪头（或拉细的普通枪头）吸取样品。
轻轻吹吸枪头，排出可能吸入的气泡。
将枪头尖端插入鲨鱼齿梳子形成的加样孔底部，缓慢、平稳地推出样品。样品因密度大会沉在孔底形成一层。
我的心得：手一定要稳，心态要平。点样时的轻微抖动都可能导致样品飘散，影响相邻泳道。

当电泳结束，在X光片或成像系统上看到那一排排间隔均匀、黑白分明的DNA条带时，你会觉得所有的严谨和付出都是值得的。

本文由北京六一生物编辑整理。

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