打开新视野：DYCZ-30C在非变性电泳与EMSA中的华丽转身

作者：六一生物发布时间：2025-11-24 09:18:40 点击：

我们的课题需要研究一个转录因子与其DNA靶序列的结合。当合作者问我们是否有做EMSA（凝胶阻滞实验）的设备时，我看向了角落里的DYCZ-30C。一个大胆的想法诞生了：它本身就是一套完美的垂直电泳系统，为什么不能？

应用一：非变性PAGE——窥探蛋白质的天然世界

方案改造核心：去除所有变性剂！

与SDS-PAGE的关键区别：

1. 无SDS：凝胶和电泳缓冲液中均不添加SDS。
2. 无还原剂：不添加β-巯基乙醇或DTT。
3. 不加热：蛋白样品不与上样缓冲液煮沸，仅温和混合。
4. 缓冲系统：通常使用Tris-Glycine pH 8.3缓冲液。

我的实战案例：

目的：验证一个蛋白复合物在溶液中的组装状态。
过程：使用DYCZ-30C灌制了一份6%的非变性凝胶。上样后，在4℃冷房中，以100V恒压电泳约2小时。
结果：与SDS-PAGE只出现单一亚基线不同，非变性胶显示出一条分子量更大的主带和几条微弱的次要条带，清晰地证明了该蛋白在天然状态下能以复合物形式存在，这为后续的功能研究提供了关键证据。

应用二：凝胶阻滞实验——验证蛋白-DNA相互作用

方案核心：在非变性PAGE的基础上，使用更低的凝胶浓度和特定的缓冲液。

我的实战流程：

1. 制胶：配制6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶，但使用0.5x TBE作为凝胶和电泳缓冲液。
2. 预电泳：在4℃冷房中，以100V预电泳60分钟。这一步至关重要，能消除自由基，稳定系统。
3. 结合反应：将纯化的转录因子与生物素标记的DNA探针在结合缓冲液中孵育。
4. 上样与电泳：加入不含变性剂的上样缓冲液，在4℃冷房中，以低电压（80-100V）进行电泳，直到溴酚蓝指示剂接近胶板底部。
5. 转膜与检测：后续通过湿转法将DNA探针转移到尼龙膜上，进行化学发光检测。

成功的结果：

游离探针条带：在膜的最下方。
蛋白-DNA复合物条带：在游离探针的上方，因为分子量更大，迁移更慢。
超迁移条带：如果加入特定抗体，可能会出现更慢的条带，证明了三元复合物的形成。

思考与价值：这次成功的“跨界”应用，不仅为我们节省了专门采购一套EMSA设备的经费，更重要的是，它让我深刻认识到，科研工具的应用潜力远比说明书上写的要广阔。充分理解原理，敢于对成熟方案进行符合逻辑的改造，就能让DYCZ-30C这样的经典设备，持续焕发出新的生命力。

本文由北京六一生物编辑整理。

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