琼脂糖水平电泳实验中如何选择合适的电泳缓冲液？

作者：六一生物发布时间：2024-05-30 09:10:58 点击：

琼脂糖水平电泳是一种常用的分离和检测生物大分子的方法，如DNA、RNA、蛋白质等。在进行琼脂糖水平电泳实验时，选择合适的电泳缓冲液至关重要。本文将详细介绍如何选择合适的电泳缓冲液，以保证实验的准确性和重复性。

一、电泳缓冲液的种类：

1、TAE（Tris-乙酸）缓冲液：虽然价格低廉，但缓冲能力相对较低。长时间电泳时，TAE缓冲液可能会被消耗，导致凝胶的阳性一侧发生酸性化，凝胶中向阳极迁移的溴酚蓝的颜色会从蓝紫色变为黄色。因此，TAE缓冲液一般用2～3次就需要更换。
2、TBE（Tris-硼酸盐）缓冲液：相比于TAE，TBE缓冲液的缓冲能力更强，可使用10次左右。它通常作为5×或10×的贮存液配制和贮存，pH值在8.3左右。在应用前需要稀释，并用同一种贮存液制备凝胶溶液和琼脂糖凝胶电泳缓冲液。
3、TPE（Tris-磷酸）缓冲液：磷酸盐浓度较高，在进行DNA回收时容易形成沉淀，因此不太常用。

二、考虑实验需求：

1、如果实验对成本有较高要求，可以选择TAE缓冲液，但需要注意及时更换。
2、对于大多数常规实验，TBE缓冲液是一个较好的选择，因为它的缓冲能力强，稳定性好。

三、缓冲液的浓度：琼脂糖凝胶电泳实验中，通常使用0.5X TBE或1X TAE作为电泳缓冲液。这些浓度可以提供足够的离子强度和pH稳定性，确保DNA分子在电场中有效迁移。

四、缓冲液的保存：TBE浓储存液长时间存放后容易形成沉淀物，因此应在室温条件下用玻璃瓶保存5X溶液，出现沉淀后就要丢弃处理。

五、电泳时间：如果电泳时间较长，建议选择缓冲能力更强的TBE缓冲液，以减少缓冲液的消耗和凝胶的酸性化。

六、其他注意事项：

1、配制缓冲液时，应使用高质量的试剂和纯净水，以确保缓冲液的纯度和稳定性。
2、使用新制的缓冲液可以显著提高电泳效果，因此建议定期更换缓冲液。

综上所述，在选择琼脂糖水平电泳实验的电泳缓冲液时，应综合考虑实验需求、成本、缓冲液的缓冲能力、稳定性以及电泳时间等因素。对于大多数常规实验，推荐使用TBE缓冲液作为电泳缓冲液。

本文由北京六一生物编辑整理。

北京六一生物科技有限公司创建于1970年，50多年的历史，公司先后3次承担电泳装置产品国家、行业标准的起草、修订工作，2009年负责《基础电泳装置》国家标准已发布实施。专业生产生物化学与分子生物学检验分析仪器的科技型国有企业。

主要生产包含电泳仪、紫外分析仪、凝胶成像分析系统、酶标仪、化学发光成像系统、基因扩增仪等检验分析设备。

如果您对我们的产品有任何问题，欢迎您的来电：400 960 6117

我们的目标是：做生物化学分析仪器行业海尔

标签：