电泳仪制胶总是失败，原来是这4个细节没做好

作者：六一生物发布时间：2025-06-13 09:13:17 点击：

精心准备实验，却在制胶环节频频翻车？凝胶凝固不均匀、气泡密密麻麻、甚至根本不凝固……这些问题不仅浪费试剂，更耽误实验进度。其实，90%的制胶失败都源于被忽略的细节。结合多年实验室实操经验，今天就带你揪出4大“罪魁祸首”，让制胶不再成为实验“拦路虎”！

一、试剂配比“暗藏陷阱”

失败表现

配制的凝胶要么太软无法支撑样品分离，要么硬得像石头，样品根本跑不动；有时凝胶还会出现分层现象，上层稀软，下层坚硬。

问题根源

1. 溶质称量误差：琼脂糖或聚丙烯酰胺粉末称量不准确。例如，使用精度不足的天平，导致实际用量与配方偏差较大。曾有新手实验员因未校准天平，多加了20%的琼脂糖，结果凝胶硬度过高，条带迁移严重受阻。
2. 溶剂比例失调：水或缓冲液加入量不准确。溶剂过多，凝胶凝固后孔径过大，分离效果差；溶剂过少，凝胶硬度过高，分子难以通过。
3. 交联剂使用不当：在制备聚丙烯酰胺凝胶时，交联剂（如N,N'-亚甲基双丙烯酰胺）的用量直接影响凝胶的交联程度。用量过多，凝胶弹性下降，易碎裂；用量过少，凝胶结构松散，无法有效分离样品。

解决办法

1. 精准称量：使用精度达0.001g的电子天平，称量前先校准。每次称量试剂后，及时清理天平托盘，避免试剂残留影响下次称量。对于用量较少的试剂（如交联剂），可先配制成高浓度母液，再按需稀释使用，减少称量误差。
2. 严格配比：按照实验要求，使用量筒或移液枪准确量取溶剂。建议将水或缓冲液的用量精确到小数点后一位，例如配制1%的琼脂糖凝胶，1g琼脂糖需对应100.0mL缓冲液。
3. 记录与复核：每次制胶时，详细记录试剂的实际用量和操作过程。完成配制后，对照配方进行复核，确保比例无误。若发现问题，及时调整或重新配制。

二、加热溶解“暗藏玄机”

失败表现

凝胶溶液冷却后出现白色絮状物，说明琼脂糖或聚丙烯酰胺未完全溶解；有时即使肉眼看不到杂质，电泳时条带也会出现拖尾、扭曲等异常。

问题根源

1. 加热温度与时间不足：琼脂糖需完全溶解在接近沸点的温度下，如果加热温度不够或时间过短，会导致部分琼脂糖颗粒残留。例如，用普通电磁炉加热，温度波动大，容易出现局部未溶解的情况。
2. 搅拌不充分：加热过程中没有持续搅拌，导致溶液受热不均，部分区域温度过高，而部分区域溶解不彻底。
3. 未趁热过滤：溶解后的凝胶溶液中可能含有未完全破碎的颗粒或杂质，若不趁热过滤，这些杂质会影响凝胶的均匀性和透明度。

解决办法

1. 规范加热操作：使用水浴锅或磁力搅拌器加热，设定温度比溶剂沸点低5 - 10℃（如配制琼脂糖凝胶，温度设为95℃），确保溶液均匀受热。加热过程中持续搅拌，直至溶液完全透明，无明显颗粒。
2. 趁热过滤：准备好预热的漏斗和滤纸，将溶解后的凝胶溶液趁热过滤到干净的容器中。过滤时动作要快，避免溶液冷却凝固。若使用聚丙烯酰胺凝胶，可通过超声处理代替过滤，去除溶液中的气泡和杂质。
3. 避免反复加热：多次加热会破坏凝胶的分子结构，影响性能。因此，尽量一次性配制所需的凝胶量，若有剩余，可冷藏保存，但下次使用前需重新加热溶解并充分搅拌。

三、倒胶过程“细节决定成败”

失败表现

凝胶表面不平整，出现波浪状或凹凸不平；凝胶中存在大量气泡，影响条带观察和分离效果；有时凝胶边缘还会出现渗漏。

问题根源

1. 倒胶环境不稳定：倒胶时桌面晃动、通风过大或操作不平稳，导致凝胶溶液流动不均，表面不平整。
2. 气泡未排除：凝胶溶液在搅拌、转移过程中容易引入气泡，若不及时排除，会在凝胶中形成空洞，影响分子迁移路径。
3. 密封不严：在组装制胶模具时，密封胶条没有安装到位，或者夹子夹紧力度不够，导致凝胶溶液渗漏。

解决办法

1. 稳定操作环境：选择平稳、无震动的桌面倒胶，关闭门窗或避免在通风橱强风环境下操作。倒胶时，将装有凝胶溶液的容器靠近模具边缘，缓慢匀速倒入，减少溶液波动。
2. 有效排除气泡：在倒入模具前，将凝胶溶液轻轻晃动或使用移液枪反复吸取、排出几次，促使气泡上浮。若仍有气泡，可用火焰（如酒精灯）快速掠过凝胶表面，利用热气使气泡破裂。
3. 确保模具密封：组装模具前，检查密封胶条是否完好，有无破损或老化。安装时，确保胶条与模具边缘紧密贴合，用夹子均匀夹紧模具四周，然后在模具底部放置一张干净的滤纸，防止溶液渗漏。倒胶后，静置几分钟，观察模具边缘是否有液体渗出，若有，及时调整夹子力度或重新密封。

四、凝固条件“影响深远”

失败表现

凝胶长时间不凝固，或者凝固后质地不均匀，局部过软或过硬；有时凝胶还会与模具分离，出现缝隙。

问题根源

1. 温度与湿度不适宜：温度过高，凝胶凝固速度过快，容易导致内部结构不均；温度过低，凝固时间延长，甚至无法凝固。湿度太大，会使凝胶表面吸水，变得稀软。
2. 催化剂添加不当：在制备聚丙烯酰胺凝胶时，催化剂（如过硫酸铵、TEMED）的用量和添加顺序会影响凝固速度和效果。用量不足，凝固缓慢或不凝固；用量过多，凝胶发热，结构被破坏。
3. 静置时间不足：倒胶后，没有给予凝胶足够的静置时间，就进行后续操作，导致凝胶内部结构不稳定。

解决办法

1. 控制环境条件：将倒胶后的模具放置在温度稳定（一般20 - 25℃）、湿度适中（相对湿度40% - 60%）的环境中。如果实验室环境无法满足要求，可使用恒温箱或干燥箱进行凝固。
2. 准确添加催化剂：严格按照配方比例添加催化剂，先加入过硫酸铵，充分溶解后再加入TEMED。添加后迅速搅拌均匀，并立即倒入模具，避免催化剂提前反应失效。
3. 充足静置时间：琼脂糖凝胶一般需要静置30 - 40分钟，聚丙烯酰胺凝胶需静置1 - 2小时。静置过程中，避免移动模具，待凝胶完全凝固后，再小心拆除模具，进行后续实验。

制胶失败看似复杂，实则每个问题都有迹可循。下次实验时，对照这4个关键细节逐一检查，告别制胶难题！你在制胶过程中还踩过哪些“坑”？欢迎在评论区分享，一起攻克实验难关！

本文由北京六一生物编辑整理。

北京六一生物科技有限公司创建于1970年，50多年的历史，公司先后3次承担电泳装置产品国家、行业标准的起草、修订工作，2009年负责《基础电泳装置》国家标准已发布实施。专业生产生物化学与分子生物学检验分析仪器的科技型国有企业。

主要生产包含电泳仪、紫外分析仪、凝胶成像分析系统、酶标仪、化学发光成像系统、基因扩增仪等检验分析设备。

如果您对我们的产品有任何问题，欢迎您的来电：400 960 6117

我们的目标是：做生物化学分析仪器行业海尔

标签：