DYCZ-24A双垂直电泳仪使用全流程：从新手到熟手的实战经验

作者：六一生物发布时间：2025-07-25 09:17:59 点击：

记得第一次用DYCZ-24A的时候，光是组装玻璃板就折腾了半小时，灌胶时还漏了一桌子，急得满头大汗。现在这台仪器陪我做了两年实验，从漏胶大王变成能稳定跑出漂亮条带的熟手，攒了一肚子实操经验。今天就把这些掏心窝子的DYCZ-24A双垂直电泳仪技巧分享出来，全是踩过坑才总结的干货，新手照着做能少走很多弯路。

一、实验前的准备工作

1. 试剂配制的实用技巧

电泳缓冲液必须当天配！这点我强调多少遍都不为过。刚开始图省事，把配好的缓冲液放冰箱存了五天，结果跑出来的条带边缘全是毛刺，像被虫啃过似的。重新按配方称Tris 3.03g、甘氨酸14.4g、SDS 1g，加去离子水定容到1L，用pH计调准8.3，跑出来的条带立马变得清清楚楚。现在我每次配完都在瓶身贴日期，超过一周直接扔掉，绝不心疼。

APS这东西特别娇气，开封超过一个月就别用了。有次赶实验没注意日期，用了瓶放了俩月的APS，配出来的胶软塌塌的，通电十分钟就从中间裂开，眼睁睁看着样本全废了，那叫一个心疼。TEMED加的时候手千万别抖，新手最好用100μl移液枪慢慢滴，我师妹第一次加就加多了，胶没灌完半管就凝住了，只能全倒掉重来。

2. 仪器检查的关键步骤

每次开实验台前，我都会花三分钟检查仪器：电极丝有没有氧化（用手摸上去涩涩的就是氧化了，得用软布擦到发亮）、密封槽里有没有上次残留的胶渣（用棉签蘸水抠干净）、电源线接口松不松。有次没检查电极，跑出来的条带一边高一边低，折腾半天才发现是电极氧化导致电流不均。

样品梳一定要提前看一眼，有次用了个齿歪了的梳子，上样时样品孔大小差一截，条带跑出来跟台阶似的。建议大家备两套梳子，日常用25齿的，做高通量筛选就换40齿的。玻璃板用之前必须用75%酒精擦两遍，上次师弟没擦干净，胶跑完粘在板上揭不下来，硬撬把胶都弄碎了。

二、凝胶制备的核心操作

1. 玻璃板组装的防漏秘诀

组装玻璃板是个技术活，新手最容易在这步栽跟头。把密封垫套在大玻璃板的凹槽里，缺口朝上，对准小玻璃板轻轻推，一定要听到"咔嗒"一声才算到位。我第一次没听到声音就灌胶，分离胶顺着缝漏了半槽，清理时胶都干在实验台上，刮了半天。

告诉你们个老师傅传的秘诀：在密封垫边缘薄薄抹一层凡士林（就像给嘴唇涂润唇膏那样薄），防漏效果绝了。但千万别涂多了，上次涂太厚，胶里混进凡士林颗粒，条带跑出来全是白点。组装好后晃一晃玻璃板，没缝隙才算合格，这步别怕费时间，不然漏胶更耽误事。

2. 配胶与灌胶的实操技巧

选分离胶浓度有个简单法子：小分子蛋白（小于30kDa）用12%，中等大小（30-100kDa）用10%，大分子（大于100kDa）用8%。配10%分离胶时，按顺序加试剂：水1.9ml、丙烯酰胺2.5ml、Tris1.5ml、SDS和APS各0.05ml，最后加TEMED时手要稳，一滴一滴加，加完轻轻晃，别晃出气泡。

灌胶时移液管要贴着玻璃板内壁，像倒水一样慢慢流，速度控制在每分钟2-3ml，太快容易出气泡。有小气泡别慌，用针尖轻轻挑一下就没了。然后沿壁加一层异丙醇液封，高度大概5mm，就像给咖啡加奶泡那样均匀覆盖，这样胶面才能平。夏天室温高，胶30分钟就凝了；冬天放37℃温箱，别超过40分钟，不然胶会变脆，拆的时候容易裂。

3. 浓缩胶制备的注意事项

分离胶凝好后会有明显的界面，像一层镜子。倒掉异丙醇，用滤纸轻轻蘸干残留液体，千万别擦胶面，会把胶刮花。配5%浓缩胶时试剂比例要准：水1.4ml、丙烯酰胺0.33ml、Tris0.25ml，其他试剂按比例加。灌的时候别没过分离胶太多，1cm就够。

插样品梳要垂直往下放，别歪着插，不然孔会变形。有次我手一抖插歪了，上样时样品全跑到相邻孔里。室温放30分钟凝好后，拔梳子要像拔瓶塞那样轻，慢慢往上提，太快会把孔扯变形。拔完用缓冲液冲一下样品孔，把碎胶冲出来，不然上样时会堵枪头。

三、上样与电泳的关键步骤

1. 样品处理的标准流程

样品处理就像给食材调味，步骤不能错。蛋白样品加5×上样缓冲液，比例4:1，95℃煮沸5分钟（用PCR仪煮最准）。核蛋白别煮超6分钟，我煮过7分钟，条带直接糊成一团。煮完立刻冰浴，让蛋白快速冷却，12000转离心30秒，上清液就是待上样的样品。

上样量别贪多，1.5mm厚的胶每孔最多30μl，加太满会溢出来污染旁边的孔。有次测低丰度蛋白，想多加样品，结果35μl直接漫出来，十条带废了五条。样品要提前编号，我习惯在离心管上贴小标签，对应实验本记录，不然上样时容易搞混。

2. 上样操作的实用技巧

把胶板装进主机时，大玻璃板朝外对准卡槽，螺丝别拧太紧，不然玻璃板会裂（别问我怎么知道的）。上槽加缓冲液要没过样品孔，下槽加到超过电极丝2mm，我在槽壁画了条线，每次加到线就停，特别方便。

上样时枪头斜着插进样品孔1mm，慢慢推样品，就像给蛋糕挤奶油那样稳。新手可以先用染料练手，掌握手感再上实际样品。加完样检查孔底有没有气泡，有的话用枪头轻轻吸掉，气泡会把样品顶起来，跑不出条带。Marker加在最左边孔，方便看电泳进度。

3. 电泳参数的设置规范

电源接线记住"红对红、黑对黑"，接反了样品会往反方向跑，白忙活一场。电压用"两步法"：先80V跑20分钟，等溴酚蓝跑到分离胶里，再调120V。夏天室温高的时候，一定要在槽子周围放冰袋，上次没放冰袋，胶跑得发烫，条带像波浪一样歪歪扭扭，降温后重做才正常。

电泳时别走开太久，时不时看看缓冲液里的气泡，均匀上升就说明电流正常。溴酚蓝跑到离胶底1cm时断电最合适，太早跑不完全，太晚小分子蛋白会跑出胶外。我一般设个闹钟，比预计时间提前10分钟回来盯着，免得前功尽弃。

四、常见问题与解决办法

1. 条带异常的排查思路

条带扭曲多半是电场不均：先看电极脏不脏（用稀盐酸擦擦），再检查缓冲液够不够，玻璃板有没有卡紧。有次条带歪得厉害，发现是一边缓冲液没加够，补满后立刻好转。条带拖尾可能是样品太多，减少上样量就行，核蛋白拖尾可以多煮1分钟，但别超过7分钟。

两块胶结果不一样？先看两边缓冲液液面是不是一样高，再检查玻璃板有没有都卡紧。溴酚蓝跑得慢可能是电压低了，或者缓冲液配稀了；跑得太快就是电压太高，或者缓冲液用太久了。这些问题多碰几次就知道怎么回事了，经验都是慢慢攒的。

2. 仪器维护的保养心得

实验完一定要立刻洗仪器！拆胶板时小心点，用塑料铲从顶端轻轻撬，听到"啵"的一声就分开了。槽子用去离子水冲干净，电极丝用软布擦，不然缓冲液结晶会腐蚀电极。有次偷懒没洗，下次用的时候电极接触不良，清理半天还耽误实验。

每周用75%酒精擦擦槽子消毒，密封垫变硬了就赶紧换（几块钱一个别省）。样品梳用完洗干净单独放，别和玻璃板堆一起。电极丝用久了会氧化，用细砂纸轻轻磨一下就亮了，不用换新的。我这台用了两年多，好好保养着，现在跑胶还跟新的一样稳。

用DYCZ-24A双垂直电泳仪越久越发现，这仪器就像个老朋友，你对它用心，它就给你靠谱的结果。刚开始总出错，现在闭着眼都能组装玻璃板，条带跑出来又直又清晰。其实没什么秘诀，就是多操作、多注意细节，遇到问题别慌，一步步排查。新手别怕犯错，每次错了记下来，下次就不会再犯，慢慢就成高手啦。

本文由北京六一生物编辑整理。

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