DYCP-37B等电聚焦跑歪条带？

作者：六一生物发布时间：2025-09-03 08:53:30 点击：

上个月折腾植物蛋白的等电聚焦实验，连续两天都在跟DYCP-37B较劲——跑出来的条带没有一板是直的，要么斜着往右上角翘，要么弯成波浪线，连买来的标准蛋白Marker都歪得不成样。我盯着成像仪里的废胶，差点把手里的离心管捏变形。

一开始我笃定是样本的问题。植物组织里杂质多，说不定是提取时没除干净酚类物质，干扰了蛋白迁移。于是熬夜重新研磨、换了新的蛋白酶抑制剂，甚至借了隔壁实验室的提取缓冲液，结果跑出来的条带还是歪的，只是歪的角度变了点。

就在我准备放弃，想申请换台仪器时，实验室做了五年蛋白组学的王哥路过，随手拿起我桌上的废胶看了看，问了我三句话：“胶条是不是直接放在槽里的？脱气后是不是立马倒胶了？平衡胶条时液体够不够？”我愣了愣，这三个操作我都按“老经验”来了，难道问题不在样本，在这些细节上？

一、条带斜着跑，原来胶条没卡进卡槽里

王哥跟着我到操作台，指了指DYCP-37B的胶槽：“你看这槽两侧有两道凹槽，胶条得卡进去，不是直接搭在上面。”我低头一看，还真有——之前用的老仪器胶槽没这设计，我就直接把胶条往槽里一放，通电就跑。

他伸手把胶条沿着凹槽往下推，直到胶条底部卡进槽底的小凸起，又轻轻拉了拉：“你试试现在还动吗？”我拽了拽胶条，纹丝不动。王哥说：“你之前没卡紧，通电后电场力一推，胶条跟着往一边滑，条带能不斜吗？”

我这才想起，第一次跑的时候，通电半小时后我凑过去看，确实发现胶条往一侧挪了一点，当时以为是错觉，没当回事。后来按他说的方法装胶：胶聚合后先拔梳子，再把胶条对准凹槽往下推，直到卡到底，用手确认固定牢了再通电。结果跑出来的条带，倾斜的问题真的减轻了一大半。

王哥还提醒我，胶槽得放水平。我之前为了方便看电泳进度，把仪器往桌边挪了挪，胶槽有点倾斜。他找了个小水平仪放在上面，调整了实验台的旋钮，直到气泡居中：“电场强度两边不均，蛋白也会往电压高的一边偏。”这点我以前真没注意过，原来仪器摆放的平整度都能影响条带。

二、条带变波浪，竟是脱气后没等漩涡平复

解决了倾斜问题，第二次跑胶，条带不斜了，但又变成了波浪状，像被风吹过的绸带。我又开始怀疑缓冲液，王哥却让我翻出实验记录，指着“脱气后立即倒胶”那一行说：“问题在这。”

他解释：“胶溶液抽真空时会产生小漩涡，肉眼看不见，但倒进去后聚合，胶的密度就不均匀，蛋白跑的时候遇到密度高的地方就绕路，自然成波浪了。”我想起每次脱气后都怕胶凝固，赶紧往槽里倒，确实没等过。

当天下午我重新配胶，脱气完成后，把烧杯放在实验台上静了5分钟。再倒胶时，明显感觉溶液比之前更平稳，倒完后对着光看，表面像镜子一样，没有一点纹路。聚合后跑胶，之前的波浪条带居然消失了，条带边缘变得很平整。

还有倒胶的速度也得注意。我以前倒胶时开头快、结尾慢，溶液在槽里形成了一层一层的痕迹。现在我试着保持手腕稳定，让溶液沿着槽壁匀速流，倒到一半时轻轻转一下胶槽，确保溶液铺均匀，胶板的质量明显好了很多。

三、条带两头翘，原来平衡液没浸满胶条

第三次跑胶，条带中间直了，但两头往上翘，像个开口向上的抛物线。我又开始调电压，从800V降到600V，结果条带还是翘，跑的时间还多了半小时。王哥看到后，让我测一下胶条两端的pH值。

用pH试纸一测，正极端pH是3.5，负极端是9.4，而我配的缓冲液理论pH应该是4.0和9.0——差了0.5。王哥问：“你平衡胶条时，液体是不是只没过一半？”我有点不好意思地点头，之前为了省平衡液，只倒了浅浅一层。

“胶条没浸满，上面的pH梯度没平衡好，蛋白在两头跑的速度不一样，就会翘起来。”他说着往培养皿里倒了足够的平衡液，把胶条放进去，确保完全浸没，还用镊子轻轻翻了翻：“两面都得泡到，不然一面平衡好，一面没平衡，也会出问题。”

这次我按他说的，让胶条完全浸在平衡液里15分钟，期间翻了两次。另外，王哥还提醒我别省预聚焦步骤——之前我觉得预聚焦浪费时间，直接跳了，现在按说明书设200V预聚焦10分钟，再升到800V正式跑。跑完拿出来一看，条带终于笔直了，连最细的杂带都清清楚楚。

四、原来这些“老经验”，在新仪器上全是坑

现在每次用DYCP-37B跑等电聚焦，我都会先检查这三点：胶条有没有卡进卡槽、脱气后有没有静放、平衡液够不够。以前总觉得“操作差不多就行”，尤其是用惯了老仪器，没意识到新仪器的设计细节有这么多讲究。

其实实验出问题时，我们很容易先怀疑样本、试剂这些“大问题”，却忽略了装胶、倒胶、平衡这些“小操作”。DYCP-37B的卡槽、预聚焦程序这些设计，看似麻烦，其实都是为了让实验更稳定。

如果你们用这台仪器也遇到条带歪的问题，不妨先别着急换样本、调参数，看看是不是胶条没卡紧、脱气后没静放，或者平衡液不够。有时候解决问题的关键，就在这些容易被忽视的细节里。</doubaocanvas>

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