DYCZ-40B 做 Western Blot 转膜参数设置

作者：六一生物发布时间：2025-09-23 09:12:57 点击：

DYCZ-40B WB转膜三年，现在闭着眼都能报出参数，但刚开始那阵子，简直是在“毁实验”的边缘反复横跳。转膜要么把小分子蛋白“跑丢”，膜上啥都没有；要么大分子还黏在胶上，丽春红染色只有模糊的影子。最崩溃的一次，电流设太高，直接把PVDF膜烫出个窟窿，前期跑胶的功夫全白费。后来踩着无数次失败的坑，总算摸透了这台仪器的“脾气”，这些全是带血带泪的实战经验，新手照着做能少走太多弯路。

一、初次踩坑：恒压还是恒流？选错模式白忙活

刚用DYCZ-40B时，我对着面板上的“恒流”“恒压”键犯了半天愁。网上教程说得模棱两可，有的说恒压稳定，有的说恒流效率高，我干脆随便选了恒压，设100V转30分钟。

拆膜那一刻心都凉了：25kDa的IL-6蛋白全跑到缓冲液里，膜上一点痕迹没有；而120kDa的受体蛋白还牢牢粘在胶上，条带模糊得像蒙了层雾。师兄路过看到我对着废膜发呆，敲了敲仪器说：“这机子的电极排布吃恒流，你用恒压能转好才怪！”

半信半疑试了次恒流，设300mA转30分钟。拆膜时手都在抖，结果marker的各条带整整齐齐印在膜上，丽春红一染，清晰得能数出条带数量，那一刻简直像打开了新世界的大门。后来才摸清规律：DYCZ-40B转膜就得锁定恒流模式，只有转200kDa以上的超大分子蛋白，才偶尔用恒压兜底，新手直接选恒流准没错。

二、基础铺垫：缓冲液配比，20%甲醇是“黄金比例”

参数设对了，缓冲液配错也白搭，这是我试了十几次才总结出的教训。常规转膜用1×Tris-甘氨酸缓冲液加甲醇，甲醇能让凝胶收缩，帮蛋白转移到膜上，但量太关键了。

上次手抖加了30%甲醇，转完膜发现蛋白条带皱巴巴的，像被揉过的纸，抗体孵育后信号断断续续；后来减到10%，30分钟只转上去一半，胶上还留着明显的条带。反复调试后才找到20%的“黄金配比”，既能保证转膜效率，又能护住蛋白活性，现在配缓冲液都不用看刻度，凭手感就能加准。

三、核心方案：按蛋白分子量“对症下药”，参数一配一个准

转膜参数没有“万能模板”，蛋白分子量大小直接决定了电流和时间的搭配，这是我们用几十次实验试出来的铁律。

四、小分子蛋白（＜30kDa）：低电流短时间，别让蛋白“跑丢”

这类蛋白迁移快得像“兔子”，稍不注意就转穿膜。上次转25kDa的IL-6，按常规300mA转30分钟，膜上几乎看不到条带，急得我差点重做样本。后来降到200mA，只转22分钟，拆膜后果然条带清晰锐利，抗体孵育后信号强得刺眼。

现在转小分子我全程盯着计时器，到点立马断电，多转5分钟都怕前功尽弃——师妹就曾多转10分钟，最后只能重新跑胶，白白浪费一下午。

五、中分子蛋白（30-100kDa）：常规参数就行，省心又高效

像Actin、GAPDH这些常用内参，参数怎么设都不容易出大错。我常用300mA转35分钟，上周转55kDa的GAPDH和72kDa的ERK1/2，拆膜后丽春红一染，两条带位置和胶上的marker完全对应，一点不偏。

试过把电流升到350mA，25分钟就转完了，但膜边缘有点发烫，条带稍微有点扩散；降到250mA又要等50分钟，赶实验时太耽误事，300mA刚好平衡了效率和效果。

六、大分子蛋白（＞100kDa）：高电流长时间，加SDS助转移

这类蛋白像“慢乌龟”，得用“高电流长时间”催着转。上次转180kDa的EGFR蛋白，按300mA转60分钟，胶上还留着明显的条带，膜上信号弱得几乎看不见。

师兄教我在缓冲液里加10%SDS，说能帮蛋白从胶上“脱下来”，再把电流升到380mA，转80分钟。这次转膜时我特意在槽外裹了层冰袋——DYCZ-40B没自带冷却，高电流转久了缓冲液会发烫，蛋白容易变性。拆膜后一看，膜上条带清晰，胶上几乎没残留，悬着的心总算放了下来。

七、应急处理：转膜出问题？不用重跑，调整参数就能救

就算参数设得再准，也难免出意外，这些应急技巧都是我从失败里抠出来的。

条带一半有一半无，大概率是转膜夹没夹紧，凝胶和膜之间藏了气泡。上次遇到这情况，我重新夹好转膜夹，把电流从300mA降到250mA，多转10分钟，第二次就转均匀了。

所有条带都弱，一般是电流太低或时间太短。之前转70kDa的蛋白，250mA转30分钟信号差，升到300mA多转5分钟，信号立马变强。要是缓冲液反复用了好几次，也会导致转膜效率低，换瓶新的立马见效。

膜上出现黑影、条带模糊，基本是过热导致的。有次高电流转膜没降温，缓冲液烫得手都不敢碰，膜上全是黑影。后来裹上冰袋，把电流降20-30mA，问题立马解决。

八、避坑总结：这些错我全犯过，别再走弯路

新手最容易犯“想当然”的错，列出来帮大家避雷：

别照搬其他仪器的参数！之前把DYCZ-30B的250mA用到40B上，转30分钟条带几乎没转上去，后来才知道两台仪器电极间距不同，40B需要更高电流。

别觉得转膜时间越长越好！我刚用仪器时转28kDa的蛋白，硬转40分钟，最后膜上啥都没有，只能重做。

别放反转膜夹方向！师妹曾把凝胶靠正极、膜靠负极，蛋白根本转不过去，转完染色一点条带没有，排查半天才发现问题。

其实DYCZ-40B的转膜参数真没那么玄乎，记住“恒流为核心，按分子量调电流时间，遇异常先查接触和降温”就行。平时多记笔记，把蛋白分子量、参数和转膜效果对应起来，很快就能找到自己的“黄金参数”。要是实在没头绪，告诉我你的蛋白分子量，我直接给你配方案，省得你走我之前的弯路！

本文由北京六一生物编辑整理。

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