DYCZ-30C垂直电泳仪在蛋白质分子量鉴定中的应用实例与分析

作者：六一生物发布时间：2025-12-22 09:16:39 点击：

蛋白质分子量鉴定是生物化学研究中的常规且关键的一步。本研究以鉴定过表达细胞系中重组蛋白的分子量为例，详细阐述了利用DYCZ-30C垂直电泳系统，结合预染蛋白Marker和SDS-PAGE技术，完成从样本准备到数据分析的全流程，验证了该设备在蛋白质研究中可靠、准确的应用价值。

一、引言

在基因工程、蛋白纯化及疾病机制研究中，确认目标蛋白的表观分子量是否与理论值相符，是判断其表达、修饰或切割状态的基础。SDS-PAGE因其操作简便、成本低廉、结果直观，成为首选的分子量鉴定方法。本应用旨在展示DYCZ-30C系统在此场景下的标准化操作流程。

二、材料与方法

1. 仪器与试剂：

仪器：DYCZ-30C垂直电泳系统，配套玻璃板（1.0mm），直流稳压电源。
样本：转染了GFP标签融合蛋白表达质粒的HEK293T细胞裂解液，以及空载体对照细胞裂解液。
Marker：预染蛋白分子量标准（10-250 kDa）。
主要试剂：30%丙烯酰胺/双丙烯酰胺、Tris、SDS、甘氨酸、β-巯基乙醇、考马斯亮蓝R-250染色液等。

2. 实验步骤：

样本制备：收集细胞，加入RIPA裂解液，冰上裂解30分钟。4℃，12000g离心15分钟，取上清。取20μL上清，与5μL 5×上样缓冲液混合，100℃煮沸10分钟。
凝胶制备：灌制 12%分离胶（针对预期~55 kDa的融合蛋白）和5%浓缩胶。

上样与电泳：

左侧第一孔加入 5μL预染Marker。
后续孔分别加入等体积（20μg）的实验组和对照组蛋白样品。
电泳条件：恒压80V（浓缩胶），进入分离胶后切换至恒压120V，直至溴酚蓝到达底部。

染色与成像：电泳结束后，凝胶置于考马斯亮蓝染色液中摇动染色1小时，脱色过夜。使用凝胶成像系统扫描。

三、结果与讨论

1. 结果呈现：

在获得的考马斯亮蓝染色凝胶图像中（可配示意图），预染Marker各条带清晰可见，提供了直观的分子量参照。
与对照组相比，实验组样品在约55 kDa位置出现一条特异性的浓集条带，与理论计算的GFP融合蛋白分子量（约27 kDa GFP + 28 kDa目标蛋白）相符。
实验组和对照组在其他位置的本底条带基本一致。

2. 讨论：

准确性分析：利用预染Marker的迁移率，可以绘制标准曲线（log分子量 vs. 迁移率Rf）。通过测量目标条带的Rf值，可在曲线上计算出其表观分子量，并与理论值进行精确比对。本例中目测即已吻合良好。
DYCZ-30C系统优势：本实验验证了该系统能提供稳定、可重复的电泳环境。1.0mm薄胶确保了染色和脱色的效率。双板夹芯式设计有效防止了漏胶，保证了凝胶的平整度，这是获得笔直、可比条带的前提。
异常情况考量：若目标条带分子量与理论值存在显著偏差（如偏大），可能提示存在翻译后修饰（如糖基化、磷酸化）或形成二聚体；若偏小，则可能发生了蛋白水解。这为进一步研究指明了方向。

四、结论

本应用研究完整展示了利用DYCZ-30C垂直电泳系统进行蛋白质分子量鉴定的标准化流程。实验结果表明，该系统操作简便、结果可靠，能够有效分离并初步鉴定目标蛋白的表观分子量，是分子生物学、生物化学实验室中一项基础且强大的工具。该流程可广泛应用于重组蛋白表达验证、抗体特异性检测、蛋白纯化过程监控等多个研究场景。

文由北京六一生物编辑整理。

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