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DYCP-36等电聚焦电泳槽电源选配与核心参数设置指南

作者:六一生物 发布时间:2025-10-11 09:09:15 点击:
    DYCP-36等电聚焦电泳槽电源选配与核心参数设置指南

一、 电源适配性:为什么DYY-10C是更稳妥的选择?

DYCP-36等电聚焦电泳槽对电源有特殊要求,其核心在于高电压和稳定输出。普通电泳电源无法满足其技术条件。

DYY-10C与DYY-12C的适配性分析:

    DYY-10C和DYY-12C均是常见的电泳电源。从参数上看,DYY-12C的输出上限(通常为3000V/200mA)高于DYY-10C(通常为2000V/100mA)。然而,对于DYCP-36的常规操作,DYY-10C的2000V输出电压已完全满足绝大多数实验需求。其100mA的电流上限也绰绰有余,因为IEF过程的电流会随着聚焦进行而逐渐下降至毫安级。

    重要提示:选择电源时,最关键的是核实输出接口的匹配性。务必确认电源的输出端子与DYCP-36的输入接口物理兼容(通常是五芯安全插座),并确保极性连接正确。连接错误可能导致仪器损坏或实验失败。

二、 伏时数(Vhr):IEF过程的核心控制参数

等电聚焦的完成度不以时间,而以伏时数(Voltage-hours, Vhr) 为最终标准。这是判断蛋白质是否已聚焦到其等电点的关键量化指标。

伏时数的概念与计算:

    伏时数是电压与时间的乘积(V * h)。例如,在1000V电压下运行10小时,累积伏时数即为10,000 Vhr。实验方案应根据所使用的IPG胶条长度和pH范围来设定目标总Vhr值。例如,17cm的IPG胶条通常需要约60,000-80,000 Vhr的总量。
参数设置策略:线性升压与阶段聚焦:

    不建议从初始就施加最高电压。推荐采用多阶段步进或线性升压程序:

1.  除盐阶段(低电压):初始设置300-500 V电压,聚焦1-2小时。此阶段旨在让样品中高浓度的离子迁移出胶条,避免初始电流过大产生过多热量。
2.  升压聚焦阶段:随后以线性或步进方式将电压逐步升高至最终目标(如10,000 V)。此过程是蛋白质根据其pI值进行迁移和聚焦的主要阶段。
3.  最终聚焦阶段(高电压):在达到最高电压后,继续运行直至累积伏时数达到预设目标。此阶段确保所有蛋白质分子充分聚焦至其等电点,形成尖锐的蛋白点。

三、 实验成败的关键辅助要素

除了电源和参数,以下因素同样至关重要:

1、冷却系统:IEF过程会产生大量热量。必须配备外置循环冷却水浴,并将水温严格设置在18-20℃。有效的热管理是防止蛋白变性、尿素析出和凝胶变形的前提,是获得高质量结果的基石。

2、样品预处理:样品的盐离子浓度是IEF的大敌。上样前必须对样品进行充分的透析或脱盐处理,确保其盐浓度尽可能低。高盐样品会导致初始电流过高、电压无法提升、背景拖尾等一系列问题。

3、试剂纯度:尿素和两性电解质的质量至关重要。尿素极易潮解,吸湿后会产生氰酸盐,引起蛋白质氨基甲酰化,导致蛋白质电荷异质性,在2D凝胶上出现“串点”现象。务必使用高纯度试剂,并将尿素溶液分装后于-20℃保存,避免反复冻融。

总之,为DYCP-36配备电源,DYY-10C是经济且足够的选择。成功的核心在于理解并精准控制伏时数,并配合严格的冷却、样品前处理和高纯度试剂。这套系统性的方案是获得稳定、可靠双向电泳结果的根本保障。


本文由北京六一生物编辑整理。

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