DYCZ-30C垂直电泳槽完全操作指南

作者：六一生物发布时间：2025-10-21 09:01:01 点击：

一、开篇引言：为什么需要一份详尽的DYCZ-30C操作指南？

DYCZ-30C双板夹芯式垂直电泳仪是国内分子生物学和生物化学实验室的经典设备，主要用于蛋白质的SDS-PAGE分离。尽管其结构经典，但许多初次接触者甚至有一定经验的操作者，仍会在玻璃板安装、凝胶配制、漏液排查等环节遇到问题，导致实验失败、时间浪费甚至安全隐患。

一份真正详尽的操作指南，不仅要告诉你“怎么做”，更要解释“为什么这么做”，并预见可能出现的“意外情况”。本文旨在成为这样一份“保姆级”教程，确保您的每一次电泳实验都能顺利、可重复。

二、实验前的核心准备：万全准备是成功的一半

在接触任何仪器前，充分的准备是至关重要的。这一环节的疏忽是后续一切问题的根源。

首先，进行仪器与耗材清点。需要准备DYCZ-30C主机，包括电泳槽底座、上槽、电极、弹簧夹或杠杆式夹板。玻璃板组件一套，包括一块光滑的短板和一块带凹槽的厚板。请务必在拿到新玻璃板时，用记号笔标记配对，避免混用导致不匹配而漏液。同时根据实验需求选择合适厚度的垫片和齿数的梳子。其他还需准备精密天平、pH计、磁力搅拌器、移液器、烧杯、微量进样器等。

其次，是关键试剂的配制。确保30%丙烯酰胺母液在4℃避光保存且未过期。配制常用的Tris-Glycine的SDS-PAGE电泳缓冲液。重要提示：如需进行非变性PAGE或Tricine-SDS-PAGE等特殊实验，缓冲体系需完全更换。催化剂APS需新鲜配制，TEMED需避光保存。

最后，也是最重要的，是安全防护。丙烯酰胺单体是神经毒剂！配制凝胶溶液时，必须戴手套，并在通风橱内操作，避免吸入粉尘或接触皮肤。电泳缓冲液和固定液可能含有刺激性化学品，操作时需佩戴护目镜和手套。

三、标准化操作流程详解：一步步走向成功

第一步是玻璃板与垫片的精准安装，这是杜绝漏液的核心。先用温和的洗涤剂和清水彻底清洗玻璃板、垫片，用蒸馏水冲洗后晾干或用无水乙醇擦拭。任何污渍或残留凝胶都会导致漏液。接着，将厚板平放在桌面上，凹槽朝上。将两条洁净干燥的垫片分别对齐厚板的长边边缘。然后，将短板光滑的一面小心地覆盖在垫片和厚板上。此时，短板、厚板与两侧垫片形成了一个底部和两侧开放的“三明治”结构。最后，将整个“三明治”组合嵌入电泳槽底座的卡槽中，然后用弹簧夹或杠杆在两侧垂直向下用力夹紧。技巧是夹紧后，从侧面观察，确保两块玻璃板完全平行，垫片被均匀压紧，无扭曲。

第二步是凝胶的灌注与凝固，这是稳定性的保障。先根据目标蛋白分子量选择分离胶浓度配制分离胶。在烧杯中按顺序混合水、缓冲液、丙烯酰胺母液，最后加入TEMED和10% APS，迅速混匀。然后用移液器或沿着短板一侧缓慢地将分离胶注入两块玻璃板之间的空隙，约至玻璃板高度的三分之二，注意避免产生气泡。立即用无水乙醇或异丁醇轻轻地在分离胶上层覆盖一层，以压平胶面并隔绝空气，促进凝固。静置约20至30分钟，可见清晰的界面。然后倒掉上层醇类，用滤纸吸干残留液体。按配方配制浓缩胶，灌满剩余空间。最后将梳子从一端倾斜地平稳插入浓缩胶中，确保齿尖未带入气泡，静置凝固。

第三步是电泳槽的组装、上样与运行。凝胶凝固后，拔掉梳子。将夹有凝胶的玻璃板组件从底座取下，安装到上槽中，通过凹槽卡紧。然后将整个上槽组件放入盛有电泳缓冲液的下槽中。接着用微量进样器吸取蛋白样品，枪头尖端伸入加样孔底部，缓慢将样品推出。样品因含有甘油会沉入孔底。切记连接电极时，上槽接负极，下槽接正极。蛋白质在SDS作用下带负电，向正极移动。最后设置电泳参数，建议浓缩阶段恒压80至100V，待溴酚蓝指示剂压缩成一条细线后，转为分离阶段恒压120至150V，根据指示剂迁移到凝胶底部附近结束电泳。

五、实验后处理与仪器维护

电泳结束后，先关闭电源，拔掉电极线。小心取出玻璃板组件。然后用塑料楔子或刀片小心地撬开玻璃板，凝胶通常会粘在短板一侧。可将其轻轻浸入转膜液或染色液中使其自然脱落。清洗时，务必立即用软布和温和清洁剂清洗玻璃板、垫片和电泳槽，去除所有凝胶残留，然后用蒸馏水冲洗，晾干备用。严禁用硬物刮擦玻璃板。

六、常见问题排查速查

以下是常见问题、可能原因及解决方案的简述：

1、遇到灌胶时漏液，可能原因是玻璃板未夹紧、垫片老化或有异物、玻璃板不匹配。解决方案是重新夹紧确保垂直受力、更换或清洁垫片、检查玻璃板配对标记。

2、遇到凝胶聚合不均或不凝，可能原因是TEMED或APS失效或量不足、温度过低。解决方案是新鲜配制10% APS、确保试剂质量、在室温下聚合。

3、遇到电泳时漏液或漏缓冲液，可能原因是上槽与玻璃板之间的橡胶密封圈老化或未卡紧。解决方案是检查并更换密封圈、确保上槽与玻璃板卡紧。

4、遇到条带扭曲或歪斜，可能原因是凝胶聚合不均匀、电极不平衡、缓冲液离子强度不一致。解决方案是确保灌胶后静置充分、检查电极是否平行、使用新鲜配制的缓冲液。

5、遇到蛋白条带扩散，可能原因是上样量过大、电泳温度过高。解决方案是减少上样量、在冷室中电泳或降低电压。

七、结语

掌握DYCZ-30C垂直电泳仪的标准操作，不仅是完成一次实验，更是培养严谨科学态度的过程。通过遵循本文的详细步骤，深刻理解每个环节背后的原理，并时刻牢记安全规范，您将能高效、可靠地利用这台经典设备，为您的科学研究提供高质量的数据支撑。

本文由北京六一生物编辑整理。

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