DYCP-38C醋酸纤维素膜电泳仪操作规程与常见问题解析

作者：六一生物发布时间：2025-12-23 09:08:31 点击：

DYCP-38C醋酸纤维素膜电泳仪操作规程与常见问题解析

第一部分：标准操作规程

一、实验前准备

1. 仪器检查：确保电泳槽清洁干燥，两侧铂金电极平整无腐蚀。准备好醋酸纤维素膜、加样器、缓冲液、滤纸桥、镊子等。
2. 缓冲液配制：根据实验要求（如常用巴比妥缓冲液，pH 8.6）配制新鲜缓冲液，倒入电泳槽两侧，液面高度一致。将滤纸桥用缓冲液充分浸透，平整搭在支架上，确保与电极和膜接触处无气泡。
3. 膜处理：用铅笔在膜的无光泽面（毛面）一端1.5-2cm处划轻标线。将膜漂浮于缓冲液表面，让其渗透后自然浸没，浸泡10-20分钟使其完全浸透。取出后用滤纸轻轻吸去表面多余液体，保持湿润。

二、加样与安装

1. 加样：将膜（毛面向上）平铺。用加样器吸取定量样本（如血清2-3μl），垂直、轻触加样线，使样品因虹吸作用成一条细直线。避免来回拖动。静置3-5分钟让样品渗入。
2. 安装：（关键步骤）用镊子将膜条毛面向下，平整地架在电泳槽的滤纸桥上，确保加样端位于阴极（黑色或“-”极）。膜必须与滤纸桥紧密接触，中间悬空部分平直无褶皱。盖上槽盖。

三、电泳运行

1. 参数设置：接通电源。通常设置电压为100-150V（对应8cm膜长），电泳时间30-60分钟（以血清蛋白区带展开3.5-4cm为准）。电流会随之稳定在约0.4-0.8mA/cm宽度。
2. 开始电泳：确认参数后启动。观察电压、电流显示应稳定。

四、后处理

1. 取出膜条：电泳结束，关闭电源。用镊子立即取出膜条。
2. 染色：直接浸入丽春红S或氨基黑10B等染色液中，染色5-10分钟。
3. 脱色：移入漂洗液（如3%冰醋酸）中反复漂洗，直至背景洁白、区带清晰。必要时可进行透明、干燥处理。

五、结束工作

1. 分析：将干燥后的膜条置于光密度扫描仪上进行定量分析。
2. 维护：务必断电后操作。倒弃缓冲液，用去离子水彻底冲洗电泳槽、电极和支架，软布擦干，保持清洁干燥。

第二部分：常见问题解析

1. 区带拖尾、扩散

原因：加样量过多；加样时动作不流畅，与膜面摩擦；电泳前样品扩散时间过长；膜条过于湿润，表面形成缓冲液池。

解决：精确控制加样量；加样器应垂直轻触后迅速离开；加样后静置时间不宜超过5分钟；用滤纸妥善吸去膜表面多余缓冲液。

2. 区带弯曲、不齐

原因：加样线不直、不均匀；膜条与滤纸桥接触不良，存在气泡或缝隙；膜条安装时有褶皱；电泳槽两侧缓冲液液面高度不水平。

解决：使用模板确保加样线平直；确保膜条平整紧贴滤纸桥，排除气泡；安装时仔细调整；检查并调整两侧缓冲液容量使其液面持平。

3. 电泳速度异常（过慢或过快）

原因：缓冲液离子强度不准确（过高则慢，过低则快）；电压设置不当；滤纸桥陈旧或未充分浸透，导致电阻增大。

解决：确认缓冲液配制准确；根据膜长度调整合适电压（常规8cm膜用100-150V）；每次更换新鲜浸透的滤纸桥。

4. 条带分离不清

原因：电泳时间不足，未能充分分离；样品蛋白浓度过高（如原倍血清）；醋酸纤维素膜本身质量问题。

解决：适当延长电泳时间，以标志物迁移距离为准；对高浓度样品进行适当稀释；尝试更换另一批次的膜。

5. 背景染色过深

原因：染色时间过长或染色液浓度过高；脱色时间不足或脱色液反复使用已失效；膜在染色前未完全浸透或受到污染。

解决：严格遵守染色时间；增加脱色液体积和更换频率，或使用新鲜脱色液；确保膜浸泡充分，使用洁净器皿。

6. 无电流或电流不稳定

原因：电源连接或电极导线松动；铂金电极氧化、污染；滤纸桥干涸或与电极接触不良；缓冲液失效或液量不足。

解决：检查所有连接点；用细砂纸轻磨或用稀硝酸清洗电极后彻底冲洗；确保滤纸桥被缓冲液完全浸透并接触良好；更换新鲜缓冲液。

7. 膜条在电泳过程中融化或断裂

原因：电流过大，导致产热过高；膜质量不佳；缓冲液离子强度过低引起电流过大。

解决：降低电压，在推荐参数下运行；确保膜完全浸湿，避免局部干燥；检查并调整缓冲液浓度。

8. 实验结果重复性差

原因：加样量、电泳时间、电压等条件不一致；不同批次的膜或缓冲液性质有差异；环境温度波动大。

解决：严格标准化所有操作步骤；尽量使用同一品牌和批次的耗材，定期检测缓冲液pH和浓度；在相对恒温环境下进行实验。

核心提示：

安全第一：操作中及结束后，勿触碰槽内，防止触电。

关键步骤：膜必须“毛面向下”安装，这是最易出错的环节。

保养核心：每次实验后务必清洁并擦干电极和电泳槽，这是仪器长期稳定的关键。

记录：详细记录每次操作的电压、电流、时间及样品情况，便于追溯和优化。

本文由北京六一生物编辑整理。

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