DYCP-31E 自动染色与高效回收方案详解

DYCP-31E本身无内置自动染色模块，需通过“预制胶内染+槽内/槽外自动化染色方案”实现自动染色；依托桥式结构、可拆卸电极与适配工具，搭配试剂盒或电洗脱，可实现核酸高效回收，兼顾速度与纯度。以下是具体实现路径与操作要点。
 
一、自动染色：从“手动浸泡”到“流程自动化”

核心思路：制胶时预混染料实现“电泳即染色”，或用槽体/外接设备完成自动化染色，减少手动操作与时间。

1. 预制胶内染（最适配的“电泳同步染色”）

这是DYCP-31E最简便的自动染色方式，无需额外步骤，电泳结束即可成像。
 

1. 操作要点：琼脂糖加热溶解后冷却至60℃，按比例加入SYBR Green、GoldView等核酸染料（如100mL胶液加5μL 10000×染料），混匀后倒入配套制胶器，制胶后上样电泳。

1. 优势：桥式结构缓冲液用量少（约1000mL），染料扩散少，条带均匀；槽体透明可实时观察，开盖断电保障安全。

1. 注意：染料避光保存，避免紫外照射分解；小片段（＜500bp）可适当提高染料浓度，增强条带亮度。

2. 槽内自动染色（电泳后直接启动，无需移胶）

利用槽体与外接摇床联动，实现电泳后自动染色，减少移胶污染。

1. 电泳结束后断开电源，保留槽内缓冲液，加入稀释好的快速染料（如1000mL缓冲液加50μL 1000×染料），轻轻混匀。

2. 盖上槽盖，将电泳槽置于摇床，50-80rpm低速振荡10-15分钟（适配QuickBlue等快速染液）。

3. 倒掉染色缓冲液，用蒸馏水冲洗1-2次，即可紫外成像。

1. 适配性：聚碳酸酯槽体耐化学腐蚀，无渗漏，适合槽内染色；可拆卸电极方便后续清洗，避免染料残留。

3. 外接自动染色仪联动（高通量场景）

搭配自动染胶仪（如六一配套染胶系统），实现“电泳-染色-清洗”全流程自动化。

1. 流程：电泳结束后，通过适配支架将凝胶托盘移至染色仪，预设程序（染色15min→清洗2次×5min），自动完成后直接进入成像，适合96孔批量样本处理。

1. 优势：排枪适配的34齿试样格与自动染色仪匹配，批量处理效率提升3倍，减少人为误差。

 
二、高效回收：从电泳优化到回收方法适配，回收率提升至80%+

1. 电泳参数优化：为回收铺垫高质量条带

1. 凝胶选择：小片段（100bp-1kb）用2.0%琼脂糖，大片段（1-10kb）用0.8%，提升条带分辨率，便于精准切胶。

1. 电压控制：恒压80-100V，避免电压过高导致条带扩散；TAE缓冲液适配长时电泳，TBE适合高分辨率分离，缓冲液最多回收2次。

1. 上样量：控制单孔上样量（DNA≤500ng），避免条带过载导致拖尾，影响回收纯度。

2. 三种高效回收方法（适配不同场景）

方法1：试剂盒胶回收（常规首选，回收率70%-90%）

1. 紫外灯下快速切取目标条带（仅保留条带区域，减少胶块体积），放入离心管，称重记录。

2. 加入3倍体积溶胶液（如Buffer GM），50℃水浴5分钟，期间颠倒混匀，确保胶块完全溶解。

3. 按试剂盒说明过柱、洗涤、洗脱（洗脱液预热至50℃，体积30-50μL），提高回收率。

1. 适配性：DYCP-31E的精准制胶器保障条带均一，切胶更精准，减少胶块浪费，提升回收纯度。

方法2：电洗脱回收（大片段/高纯度需求，回收率80%+）

利用DYCP-31E的稳定电场，搭配电洗脱装置实现高效回收。

1. 电泳后切取目标条带，放入透析袋，加入少量缓冲液，置于电洗脱槽，设置恒压60-80V，洗脱30-60分钟（片段越大，时间越长）。

2. 回收透析袋内液体，用酚-氯仿抽提或试剂盒纯化，去除杂质。

1. 优势：高纯铂金电极（≥99.95%）电场均匀，减少片段扩散，电洗脱后片段完整性好，适合质粒、大片段DNA制备。

方法3：槽内直接回收（微量样本，快速简便）

针对少量样本，利用桥式结构缓冲液少的特点，实现快速回收。

1. 电泳结束后，定位目标条带位置，用移液器在条带对应槽底区域吸取缓冲液（避免吸到凝胶碎片）。

2. 加入核酸浓缩柱（如Amicon Ultra-0.5），14000g离心5分钟，浓缩回收样本，适合紧急验证场景。

1. 注意：缓冲液用量少（1000mL），回收时避免污染，可先标记条带位置再操作。

 
三、关键优化与故障排除
 

目标	优化要点	故障排除
染色均匀	内染时染料混匀，槽内染色低速振荡	条带模糊：降低电压至80V，延长染色时间；无荧光：更换新染料，检查成像参数
回收高效	精准切胶，溶胶彻底，洗脱液预热	回收率低：胶块未完全溶解→延长水浴时间；洗脱体积过大→减少至30μL
避免污染	可拆卸电极彻底清洗，染色后蒸馏水冲洗	交叉污染：制胶器与托盘分开清洗，电泳槽用75%酒精擦拭消毒

 
四、应用场景与参数推荐
 

场景	染色方案	回收方法	推荐参数
PCR产物验证	预制胶内染	试剂盒回收	胶浓度1.5%，电压100V，洗脱体积30μL
质粒提取鉴定	槽内快速染色	电洗脱	胶浓度0.8%，电压80V，洗脱60分钟
高通量筛查	自动染色仪联动	批量试剂盒回收	34齿试样格，染色15min，回收按96孔批量处理

需要我结合你的样本类型（如PCR产物/质粒/大片段DNA），定制一份包含染色浓度、回收方法、参数设置的可直接套用SOP吗？



本文由北京六一生物编辑整理。

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