DYCZ-30C双板夹芯式垂直电泳仪标准实验方法

作者：六一生物发布时间：2025-07-16 09:51:18 点击：

DYCZ-30C双板夹芯式垂直电泳仪标准实验方法

一、仪器组装与凝胶制备规范

上周帮新来的师妹组装DYCZ-30C时，她因为没戴手套直接拿玻璃板，留下的指纹在电泳时形成了杂带。所以每次实验前，我都会强调必须戴手套操作，所有部件都要用去离子水冲洗晾干，尤其是玻璃板上的油污和杂质，哪怕一点点都会影响凝胶聚合。

组装制胶模具时，我有个独家小窍门：把带凹槽的玻璃板和平板对齐后，先在两侧各夹一个夹子固定，再从中间向两边依次夹满夹子，这样能保证玻璃板受力均匀。有次师弟组装时夹子只夹了两边，灌胶到一半就从中间漏了，白白浪费了一管丙烯酰胺。这款电泳槽的凝胶板是105×185mm的标准尺寸，我通常按这个规格计算，分离胶配15ml、浓缩胶配5ml刚好够用，缓冲液总容量1750ml，加液时我会用烧杯提前量好，避免加太多溢出。

- 凝胶溶液配制：上次做60kDa左右的蛋白分离，选了10%的丙烯酰胺浓度，分离效果特别好。加TEMED和APS时要像调鸡尾酒一样轻轻搅动，别用力过猛产生气泡。灌胶到2/3高度后，我习惯用1ml移液枪沿玻璃板壁缓慢加异丙醇覆盖，这样胶面能压得特别平整。之前试过用去离子水覆盖，结果胶面坑坑洼洼的，上样后条带都歪了。

- 浓缩胶制备：分离胶聚合好的标志是插入枪头不会下陷，倒掉异丙醇后一定要用吸水纸吸干残留液体，不然浓缩胶和分离胶之间会形成水层。插试样格时要垂直对准，轻轻按下直到梳子底部与玻璃板平齐，上次师妹把梳子插歪了，结果上样孔一边深一边浅，样品跑得参差不齐。

- 冷却系统连接：夏天做电泳时冷却系统简直是救命稻草。上周室温32℃，有个组没开冷却，电泳到一半胶就开始发烫，条带跑得像波浪线。我们实验室的DYCZ-30C接了循环冷水机，灌胶前我都会先开5分钟冷却水，检查水管接口有没有水珠渗出，确保冷却通畅后再开始实验。

二、样品制备与上样标准化流程

上周处理细胞总蛋白样品时，师妹直接把样品和上样缓冲液混好就上样了，结果条带模糊不清。后来才发现她没加热变性，蛋白没充分展开。正确的做法是：蛋白样品与2×上样缓冲液1:1混合后，必须95℃加热5分钟，我通常用PCR仪加热，温度精准又方便计时。加热后还要12,000rpm离心1分钟，把管壁上的液滴甩下来，不然上样时会有气泡。

DYCZ-30C的试样格选择特别灵活：常规实验我用25齿1.0mm的梳子，一次能跑24个样品加1个Marker；做蛋白质组学实验时换52齿的梳子，配合双排胶一次能处理100多个样品，效率特别高。

- 上样操作要点：凝胶聚合好后拔梳子是个技术活，要像拔瓶塞一样垂直向上轻轻用力，千万别左右摇晃。上次我急着赶实验用力过猛，把上样孔撕破了两个，只好放弃那两个孔位。上样时我会用10μl平头枪头，先把枪头伸进上样孔底部1mm处，缓慢推样品，看到样品在孔底形成一条横线就说明上样成功了。第一次用的时候手一抖，样品直接冲到了相邻孔里，结果两个样品的条带混在了一起。

- 分子量标记设置：我习惯在最左边的孔上Marker，这样方便后续分析。上次做批量样品检测，剩下三个空孔没填缓冲液，结果边缘的条带明显比中间的宽，后来查资料才知道这是边缘效应，现在空孔我都会用1×上样缓冲液填满。

- 缓冲液添加规范：内外槽的缓冲液必须用同一批次配制的，不然离子强度不一样会影响迁移速度。外槽液面要没过电极丝2mm以上，内槽液面比外槽稍低一点，这样电泳时缓冲液能形成循环。有次外槽液面不够，电极接触不良，电流忽高忽低，条带跑得歪歪扭扭的。

三、电泳参数优化与过程监控

上次帮药理组做药物处理后的蛋白电泳，因为没注意电极极性接反了，结果样品全跑到胶顶上去了，白白浪费了一天时间。所以现在接电源前，我都会默念一遍“蛋白向正极跑”，确认电极线红色接正极、黑色接负极后再开机。

根据我的经验，蛋白电泳分段调电压效果最好：浓缩胶阶段80V恒压，大概30分钟就能看到溴酚蓝在浓缩胶里聚成一条细线；进入分离胶后调到120V，这样既能保证分离效果，又不会让胶太热。上次做核酸电泳，10.5cm的胶用了80V电压，40分钟就跑完了，条带特别清晰。

- 冷却系统调控：夏天做电泳时，我会把冷却水温设10℃，流速调到0.8L/min，摸槽体时凉凉的刚好。有次冷却水管接口松动漏水，电泳到一半发现胶面发烫，赶紧停机处理，还好发现及时，不然胶就废了。现在我每次上样前都会先开5分钟冷却，检查水管有没有漏水。

- 实时监控指标：透过透明槽体观察溴酚蓝迁移特别方便，正常情况下应该是一条平直的线。上周有块胶的溴酚蓝前沿中间凸两边凹，拆开一看才发现中间的凝胶没灌满，有气泡在里面。如果槽体温度超过30℃，我会暂停电泳让它冷却一会儿，不然条带会扩散。

- 多槽并联使用：上个月做动物实验的批量样品，我们并联了两个DYCZ-30C电泳槽，电源总电流控制在400mA以内，两个槽的电泳效果完全一致。但一定要保证两个槽的凝胶厚度和缓冲液相同，之前有次一个槽用1.0mm胶、一个用1.5mm胶，结果条带迁移速度差了很多。

四、电泳后处理与设备维护标准

当溴酚蓝跑到凝胶底部1cm左右时，我就会关闭电源，这个时间点的条带分离最完整。记得有次贪多跑太久，溴酚蓝跑出胶外，小分子蛋白也跟着跑丢了。拆电泳槽时要用专用的塑料楔子，从玻璃板一角轻轻撬开，DYCZ-30C的双板夹芯设计比老式设备好太多，以前用的电泳槽每次取胶都要费半天劲，还经常把胶弄破。

- 设备清洁规程：做完实验我会立即用去离子水冲洗所有部件，电极上的盐渍要用软布擦干净，有次忘了清洗，第二天发现电极上结了层白霜，用细砂纸打磨半天才恢复原状。玻璃板我会单独用镜头纸擦拭，避免被其他部件刮花，保持透明度才能清楚观察电泳过程。

- 关键部件检查：每周我都会检查一次电极，发现有氧化痕迹就用细砂纸轻轻打磨。密封条老化是漏胶的常见原因，我在实验室备了一包备用密封条，发现有裂纹就及时更换。冷却水管每月用去离子水冲洗一次，防止水垢堵塞。

- 长期存放建议：暑假前我会把所有部件彻底晾干，玻璃板放进专用保护套，整个设备放进防尘箱里。去年夏天没做好防晒，聚碳酸酯槽体有点变黄，还好不影响使用。试样格我专门找了个塑料盒存放，再也不用担心齿被压弯了。

五、特殊应用与技术拓展

上周做双向电泳第二向分离时，DYCZ-30C双板夹芯式垂直电泳仪的双板夹芯设计派上了大用场，把第一向的IPG胶条嵌进浓缩胶特别方便，分离出的蛋白点又多又清晰。有次帮免疫组做Western blot前处理，用这款电泳槽分离的凝胶转印后，条带锐利度明显比其他设备好，抗体用量都省了不少。

在种子纯度检测实验中，我用双排胶配合52齿试样格，一次就分析了100多个样品，比单排胶效率翻倍。有个小技巧分享给大家：做4%-20%的梯度胶时，我会提前一天晚上配制，让它在4℃冰箱慢慢聚合，第二天早上用效果最好。做荧光检测时我改用1.0mm薄胶，SYPRO Ruby染色后信号特别强，曝光时间都能缩短一半。

我们实验室专门建了本实验日志，详细记录每次的凝胶配方、电泳参数和条带照片，上次新来的老师看了日志，很快就掌握了操作技巧。这款荣获北京市高新技术产品证书的电泳仪，确实是实验室里的“多面手”，只要按标准方法操作，各种实验场景都能应对自如。

本文由北京六一生物编辑整理。

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