DYCZ-40D迷你转印电泳仪标准化实验方法指南

作者：六一生物发布时间：2025-07-07 09:30:48 点击：

用DYCZ-40D做转印实验快两年了，从一开始对着说明书发呆，到现在能闭着眼组装转印夹，总结出不少能让实验一次成功的"标准动作"。这台北京六一的小设备操作不复杂，但想每次都转出清晰条带，每个步骤都得按规矩来。今天就把DYCZ-40D做转印实验这些标准化的做法分享出来，照着做，新手也能少走很多弯路。

一、实验前准备与缓冲液配制

做实验就像做饭，准备工作做好了，后面就顺利多了。我每次做转印前，都会提前半小时把东西备齐，省得手忙脚乱。

1、转印缓冲液怎么配才好用？

最常用的配方是Tris-甘氨酸缓冲液，具体比例记不住没关系，我把配方写在便利贴上贴在试剂柜上：3.03g Tris碱+14.4g甘氨酸，加800ml去离子水溶解，再倒200ml甲醇，最后补够1000ml。这个配方对大多数蛋白（10-150kDa）都好用。

但遇到特殊蛋白得调整：上次转一个200kDa的大蛋白，条带总是拖尾，把甲醇减到10%，再加1g SDS（别多放，会影响膜结合），立马就清晰了。转小蛋白（比如15kDa的细胞因子）时，甲醇加到25%，能防止蛋白穿过膜跑掉，这是我试了5次才找到的最佳比例。

缓冲液配好后别直接用，4℃冰箱放半小时再拿出来，温度太低也不行，提前10分钟取出回温，不然凝胶遇冷收缩，转印时容易有空隙。

2、转印膜的处理有讲究

NC膜和PVDF膜用法不一样，千万别弄混：NC膜直接扔缓冲液里泡5分钟就行；PVDF膜得先用甲醇泡1分钟（看到膜变透明就是激活了），再换缓冲液泡，不然蛋白挂不住。

剪膜的时候记得比凝胶大1-2mm，边缘对齐，别剪太小，不然边上的蛋白转不到膜上。戴手套操作是必须的，上次有个同学没戴手套，手上的油脂沾到膜上，结果那一块条带直接消失了。

3、凝胶准备的小细节

SDS-PAGE跑完胶，别急着拿出来，先倒点转印缓冲液泡2分钟，把胶里的电泳缓冲液冲掉。拿凝胶的时候用薄塑料板铲，别用手直接捏，边缘容易碎。

我习惯把凝胶左下角剪个小三角当标记，转印完膜上也能对应上，免得后面孵育抗体时弄反方向。胶的厚度别超过1.5mm，太厚转不透，上次有个师妹跑的2mm厚胶，转了2小时还有一半蛋白在胶里。

预染Marker一定要加，最好两边都加，转印的时候能直观看到蛋白跑的情况，比瞎等靠谱多了。

二、标准化转印操作步骤

1、转印夹组装的"黄金顺序"

这个"三明治"结构记不住就完蛋：黑色阳极板→海绵垫→三层滤纸→凝胶→膜→三层滤纸→海绵垫→白色阴极板。我编了个口诀："黑垫纸胶膜，纸垫白"，默念两遍就忘不了。

组装时用"湿法"：所有东西都先在缓冲液里泡透，拿出来轻轻挤掉多余液体，再一层层放。最关键的是赶气泡，用玻璃棒像擀饺子皮一样慢慢滚，特别是胶和膜之间，有气泡的地方转印完就是白班。上次赶气泡太急，玻璃棒划破了凝胶，那组数据直接废了，所以一定要轻。

放凝胶和膜的时候记住"黑对黑"：凝胶的黑色面（就是跑电泳时朝里的那面）对着膜的光滑面，别弄反了，不然蛋白跑不到膜上。

2、电源设置的"安全守则"

这设备得用DYY-7C电源，别随便换别的型号。接线时黑色接黑色（阳极），红色接红色（阴极），接反了转印完膜上啥都没有，别问我怎么知道的。

开机前把电压电流旋钮都拧到0，慢慢往上调，5分钟内升到100V，别一下拧到底，电流突然变大容易发热。常规蛋白转60-90分钟就行，我一般设75分钟，保险。

夏天温度高的时候，记得在槽里放个预冷的冰盒（用密封袋包好，别漏水），不然缓冲液升温太快，蛋白容易变性。摸槽体有点烫手的时候，就把电流调小20%，降温效果立竿见影。

3、转印过程要盯紧

刚开始运行的10分钟很关键，看看电流稳不稳定，正常情况下会慢慢升到200mA左右，然后稳定下来。如果电流忽高忽低，可能是电极接触不良，断电擦擦电极再试。

转印到一半（大概45分钟），可以关电源开盖看看，用镊子轻轻提一下膜的边角，别把整个拿出来，看Marker转得怎么样。要是小分子量的Marker已经到膜上了，就没问题；大的还在胶里慢慢爬是正常的。

千万别让缓冲液没过转印夹上面的线，上次加太多，液体从缝里渗出来，电流一下就降了，还好发现及时，不然样品就废了。

三、转印后处理与效率评估

1、怎么判断转印完成了？

看预染Marker是最直接的：胶上的Marker条带基本消失，膜上对应的条带清晰，就差不多了。常规蛋白100V转90分钟肯定够，大蛋白可以多转30分钟，小蛋白别超过60分钟，免得跑过了。

关掉电源别急着拆，等1分钟再开盖，让电流稳定下来。拆的时候从两边慢慢掀开，别用力扯，膜很容易破。

2、转印效率怎么检查？

最保险的方法是"胶膜双检"：把转完的胶用考马斯亮蓝染一下，要是没什么条带，说明转印成功；膜用Ponceau S染1分钟，自来水冲掉 excess，能看到清晰的蛋白条带，就可以进行下一步了。

Ponceau S染色不影响后续抗体孵育，放心用。要是条带模糊，可能是转印时间不够或者电流太小，下次就调整参数。

3、膜的保存小技巧

转印完的膜如果当天不孵育，用TBST洗两遍，包在保鲜膜里，放4℃冰箱能存3天。要存更久就-20℃冷冻，记得放密封袋里防潮，我存过一个月的膜，孵育出来条带还很清晰。

孵育前一定要用TBST洗膜3次，每次5分钟，把残留的转印缓冲液洗掉，不然背景会很高。

四、实验优化与问题排查

1、特殊样本的处理方法

膜蛋白转印老出问题？试试在缓冲液里加0.1%SDS和0.5%脱脂奶粉，能帮蛋白从膜上"脱下来"。上次转一个难溶的膜蛋白，用这方法条带强度提高了一倍。

酸性蛋白容易粘在胶上，把甲醇降到10%，转印时间延长30分钟，能改善不少。双向电泳的胶转印时用80V低压慢慢转，转2小时，蛋白点不容易变形。

2、常见问题怎么解决？

- 膜上有白色斑点：肯定是有气泡，组装时用玻璃棒多滚几遍，特别是边角。
- 条带歪了：转印夹没夹紧，海绵垫老化了就换新的，保证压力均匀。
- 背景太高：膜没洗干净，或者封闭时间不够，下次用5%脱脂奶粉多封闭30分钟。
- 没电流：电极氧化了，用棉签蘸乙醇擦擦，还不行就换电极片，别硬撑。

每次实验我都记个小本子，把参数、温度、转印时间都写上，下次出问题翻一翻就知道哪不对，比瞎猜强多了。

其实DYCZ-40D这台设备挺"懂事"的，你按规矩操作，它就给你出好结果。这些标准化的步骤看着麻烦，熟练了也就10分钟的事，但能让实验成功率从60%提到90%以上，值！

本文由北京六一生物编辑整理。

北京六一生物科技有限公司创建于1970年，50多年的历史，公司先后3次承担电泳装置产品国家、行业标准的起草、修订工作，2009年负责《基础电泳装置》国家标准已发布实施。专业生产生物化学与分子生物学检验分析仪器的科技型国有企业。

主要生产包含电泳仪、紫外分析仪、凝胶成像分析系统、酶标仪、化学发光成像系统、基因扩增仪等检验分析设备。

如果您对我们的产品有任何问题，欢迎您的来电：400 960 6117

我们的目标是：做生物化学分析仪器行业海尔

标签：