电泳仪校准全流程实战指南

    去年冬天，我们实验室连续三周陷入 “条带魔咒”—— 同样的 PCR 产物、相同的胶浓度，跑出来的条带却一次比一次歪，最严重的时候， Marker 像条波浪线。组里的博士师兄熬了两个通宵排查，最后用万用表一测电源，好家伙，显示 100V 的输出实际只有 93V，波动早就超过 ±5%，远远超出标准要求的 ±1%。这才明白，不是样本有问题，是电泳仪 “失准” 了。

电泳仪就像实验的 “天平”，校准不到位，跑再多次都是白搭。结合我们踩过的坑，整理出这套校准实战指南，每个步骤都带着实验室的温度和教训。

一、电源校准：从 “数字欺骗” 到 “毫厘不差”

真实场景：电压不准，白熬三天夜

上个月处理一批临床样本的 PCR 产物，要求条带误差不能超过 0.3mm。前两次跑胶，目标条带忽左忽右，怀疑是缓冲液配错了，重新配了三次，结果还是一样。直到用万用表测了电源 —— 设备显示 120V，实际只有 112V，偏差快 7% 了。这三天的通宵，全耗在一个 “不准的数字” 上。

操作细节：

1. 工具准备：高精度万用表（至少四位半显示，我们用的是福禄克 15B+）、绝缘手套、小螺丝刀（修眼镜的那种最好用）。
2. 检测步骤：
   1. 先把电泳仪电源调到常用档位（比如 100V、200mA），开机预热 10 分钟（冷机状态下误差会更大）。
   2. 万用表红笔接正极输出口，黑笔接负极，手别碰金属头（试过一次没戴手套，麻得手指半天没知觉）。
   3. 记录显示值和实测值，连续测 3 次取平均，偏差超过 ±1% 就得校准。

1. 校准技巧：
   1. 以我们常用的 BioRad PowerPac 为例，拆开外壳后，能看到一个蓝色的小电位器。顺时针转 0.5°，电压会升高 0.1V 左右，慢慢来，别贪多（有次手一抖转了 2°，直接飙到 150V，吓出一身汗）。
   2. 国产仪器比如六一的电源，校准孔在背面，用牙签戳进去调更方便，记得调完后用记号笔做个标记，下次就知道有没有动过。

1. 频率建议：每月校准一次，要是实验室电压不稳（比如老楼经常跳闸），两周一次更保险。

二、凝胶均匀性测试：揪出 “微笑条带” 的真凶

真实场景： Marker 笑了，实验哭了

师妹第一次独立做大规模筛选，灌了四块 0.8% 的琼脂糖胶，跑出来的条带全是 “微笑脸”—— 中间凹两边翘。她以为是胶没灌平，重新灌了两次还是这样，急得快哭了。后来发现是电极铂金丝上结了层氧化膜，电流过不去，电场才歪了。

操作细节：

1. 标准测试法：
   1. 灌一块 10cm×10cm 的 0.8% 琼脂糖胶，每个孔都加等量的 100bp DNA Marker（别省， Marker 贵但比重做实验划算）。
   2. 100V 恒压跑 30 分钟，正常情况下条带应该是直线，边缘和中间对齐。

1. 问题排查：
   1. 条带 “微笑”（中间凹）：多半是中间温度高，检查铂金丝是不是有一段氧化了（用 1M HCl 泡 5 分钟，氧化膜会冒泡溶解，亲测比砂纸磨管用）。
   2. 条带 “哭脸”（中间凸）：可能是两边胶太厚，或者制胶架没卡紧，导致边缘电场弱。我们试过在两边垫张滤纸，居然能救回来。
   3. 单块胶条带歪：看看是不是漏液了，缓冲液一边多一边少，电场就会跑偏。

1. 隐藏技巧：灌胶时在胶里插根细铜丝，跑胶后看铜丝周围的条带，能快速判断电场是不是绕着障碍物走了。

三、环境校准：别让湿度和温度毁了实验

真实场景：梅雨季的 “短路惊魂”

南方梅雨季，实验室湿度经常飙到 85%。有次跑胶跑到一半，电源突然报警，拆开槽盖一看，槽壁上全是冷凝水，滴到电极上短路了。幸好及时断电，不然主板就烧了，那台 DYCZ-24KF 才买了三个月。

操作细节：

1. 湿度控制：
   1. 湿度 > 70% 时，先空跑 10 分钟 —— 不加胶，让电流产生的热量把潮气烘干，跑完会看到槽盖上全是水珠。
   2. 在槽盖内侧贴一圈吸水滤纸（普通定性滤纸就行），每次换胶时换一张，成本几毛钱却能防大错。
   3. 特别潮湿的时候，在电泳槽旁边放盆生石灰，比除湿机省钱，就是记得别打翻了。

1. 温度校准：
   1. 夏天室温超过 28℃，跑蛋白胶一定要用冰浴 —— 把槽子放冰盒里，缓冲液每 20 分钟换一次，不然条带会糊成一团（血泪教训：一次没换冰，30kDa 的条带跑成了一片云）。
   2. 用红外测温枪打一下胶面，温度超过 30℃就得降温，尤其是四板同时跑的时候，中间的胶温度最高。

1. 水平校准：
   1. 老实验台不平是常态，找个水平仪垫在电泳槽底下，左边垫张 A4 纸还是右边垫本书，调平了胶才不会一边厚一边薄。我们实验室的 “神器” 是个啤酒瓶垫，刚好能调 0.5cm 的高度。

四、校准后的惊喜：数据漂亮了，心情舒畅了

自从规范校准后，我们实验室的变化特别明显：

1. 数据重复性从 78% 提到了 96%，以前跑三次才能成一次，现在一次就能用。
2. 样本浪费少了，上个月算下来，光 Marker 就省了两盒，还不算熬夜的人力成本。
3. 最意外的是，师妹的论文图一次就过了审，审稿人说条带太整齐了，不像 “做出来的”（这是夸人吧？）。

最后想跟大家说，校准这事看着麻烦，其实就像给仪器 “体检”，花一小时能省一周的功夫。我们把校准步骤贴在仪器上，新来的同学也能照着做，再也不用追着师兄问 “为什么我的条带歪了”。实验嘛，细节稳了，结果自然就稳了。


本文由北京六一生物编辑整理。

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