DYCZ-25D型双垂直电泳仪实验常见问题与解决方案

作者：六一生物发布时间：2025-07-22 09:30:42 点击：

用DYCZ-25D跑胶快两年，从一开始的"三天两头出状况"到现在能轻松应对各种小问题，我积累了一整本实验笔记。这台仪器虽然稳定，但实际操作中总会遇到些意想不到的状况——条带歪了、胶漏了、Marker跑不出来...今天就把这些DYCZ-25D型双垂直电泳仪实战经验整理出来，全是实验室摸爬滚打总结的干货。

一、凝胶制备阶段的常见问题

1、漏胶问题及处理

灌胶漏胶是新手最容易踩的坑，我第一次用这台仪器就因为玻璃板没卡紧，眼睁睁看着分离胶流了一槽。后来才掌握诀窍：安装玻璃板时一定要听到"咔嗒"声，这是卡紧的信号。

如果灌胶时发现漏胶，立即停止操作重新安装。橡胶密封垫用久了会变硬，用75%酒精擦拭软化就能改善密封性，实在不行就换个新垫，几块钱能省不少麻烦。有次紧急实验我用牙签蘸凡士林抹在缝隙处临时补救，效果不错，但记得别涂太多以免污染凝胶。

2、凝胶界面不平整

第一次独立灌胶时，我把胶液倒得太快，界面歪得像波浪。正确做法是用10ml移液管匀速推注，让胶液顺着玻璃板内壁流下，速度控制在每分钟3ml左右最合适。

灌完分离胶必须做好液封，我对比过多种试剂，发现异丙醇效果最好。液封时沿壁缓慢加入，保持5mm高度即可，太高容易混入胶中。若胶面有小气泡，用针尖轻轻挑破就行，别使劲戳以免留下小孔。有次液封没铺匀，结果胶面一边高一边低，跑出来的条带也跟着歪斜。

3、凝胶聚合异常

去年冬天配好的胶放了一小时都没凝固，师兄提醒我室温低于20℃时，把玻璃板放进37℃温箱十几分钟就能加速凝固。但千万别放太久，有次忘在温箱两小时，胶硬得像塑料，跑出来的条带全糊了。

APS和TEMED是聚合关键试剂，APS必须4℃冷藏，开封超过一个月就别用了——我吃过这亏，用过期APS配的胶跑电泳时居然散架了。TEMED要少加慢加，新手建议用移液枪滴加，宁少勿多，加多了胶会脆生生的容易裂。

二、电泳过程中的突发状况

1、条带扭曲变形

最头疼的一次是跑临床样本，条带歪得像麻花，重复三次都这样。后来发现电极丝上结了白色结晶，用去离子水冲洗擦干后就正常了。原来缓冲液盐分会沉积在电极上，影响电流分布，每次实验前最好擦一擦电极。

还有次两块胶一起跑，左边条带笔直右边全歪了。拆开发现右边玻璃板没卡紧，有条小缝隙导致电场偏移。重新装紧后问题立刻解决，这才明白"咔嗒"声多重要。DYCZ-25D需要加够750ml缓冲液，液面必须没过电极丝2mm，我专门在槽壁画了刻度线，每次加液到线就停，省心多了。

2、电流电压异常波动

上周跑胶时电源指针忽上忽下，断电排查发现是用了上周剩下的缓冲液，离子强度不够了。换新配的缓冲液后电流立马稳定，从此养成每次实验用新鲜缓冲液的习惯。

电极接触不良也是老问题，插头氧化会导致电阻变大。有次我用砂纸轻轻打磨插头触点就解决了问题。DYCZ-25D配DYY-6C型电源很稳定，我们实验室备了个旧电源当备用，怀疑电源有问题时换下来试试就知道了。

3、凝胶过热现象

夏天实验室没空调时，电泳槽烫得能煎鸡蛋，条带模糊不清。后来摸索出两个办法：用4℃预冷的缓冲液跑胶，温度能低5℃左右；或把电压从120V降到100V，虽然多花20分钟，但条带清晰多了。

有次急着出结果没降电压，胶跑完发烫，Marker条带全连在一起。师兄教我在槽边放冰袋降温（用塑料袋包好防漏水），效果特别好。但千万别让冰块直接贴槽体，温差太大会让玻璃板裂掉，我见过别人这么干报废了一块玻璃板。

三、结果分析时的疑难问题

1、条带拖尾严重

处理核蛋白样本时条带拖得像彗星，后来严格执行"95℃煮5分钟，立即冰浴3分钟"的流程，离心后取上清上样，拖尾问题基本解决。上样量也很关键，1.0mm胶每孔别超过20μg，上次贪心加了30μg，条带立马糊了。

复杂样品建议用52齿梳子，孔多了每孔上样量少，条带更清晰。有次做细胞总蛋白分析，用25齿梳子跑出来全是拖尾，换成40齿后立马改善，虽然上样麻烦点，但结果好看多了。

2、条带分辨率低

刚开始分离小分子蛋白时条带挤在一起，老师让我把分离胶浓度从10%提到12%，果然分开了。后来总结出规律：30kDa以下用12%胶，30-100kDa用10%胶，大于100kDa用8%胶，效果准没错。

电压调节有技巧：样品进分离胶前用80V，看到溴酚蓝到分离胶界面时调至120V。有次图快一直用120V，样品在浓缩胶里没压好，条带歪歪扭扭的。恒压电泳比恒流更稳定，这是我们对比十几次得出的结论。

3、Marker条带异常

Marker跑不出来真能急死人！有次怀疑仪器坏了，折腾半天发现是Marker反复冻融失效了。现在Marker都分装成小份，一次用一管就没这问题了。上样时枪头要伸进孔底慢慢推，太快会产生气泡，我见过气泡把Marker条带拦腰截断的情况。

如果Marker只跑出一半条带，大概率是电泳时间不够。溴酚蓝跑到凝胶底部1cm时断电最合适，有次提前5分钟停，大分子Marker条带全没跑出来。冬天胶凝得硬可延长5分钟，夏天则可以提前点，这些细节都得慢慢摸索。

四、DYCZ-25D型双垂直电泳仪器维护与保养要点

1、日常清洁保养

实验结束后一定要及时清洗，我以前做完就丢一边，结果缓冲液干在槽里结成硬块，很难刮掉。现在每次用完立马拆洗，电极丝用软布蘸稀盐酸擦去氧化层，亮晶晶的才放心。

玻璃板上的残胶特难洗，泡在5%乙酸溶液里过夜，第二天用软毛刷轻轻一刷就掉。千万别用钢丝球或刀片刮，我师妹刮坏过玻璃板，边缘全是划痕，灌胶时总藏气泡。清洗完的玻璃板要竖直放，别叠着压，不然会变形。

2、部件定期检查

每月我都会检查密封垫，看有没有裂纹或变硬。橡胶件老化要及时换，几块钱的配件能避免漏胶惨案。螺丝也要逐个拧紧，有次跑胶时听到"滋滋"声，发现是螺丝松了导致漏液导电，吓出一身冷汗。

电极丝半年检查一次有没有断裂，上次发现一根有小缺口，赶紧联系厂家换新的，没耽误实验。平时插拔电源要轻，别使劲拽线，电极接口坏了修起来挺麻烦。

3、长期存放注意事项

放长假前一定要彻底清洗仪器，去年没洗干净，秋天回来发现槽底长了霉点。所有部件擦干后，玻璃板放进专用架子，小零件装密封袋里。橡胶密封垫最好泡在蒸馏水里，防止变干开裂，用的时候再拿出来擦干。

重新启用时别着急做实验，先空跑一次看看。有次寒假回来直接用，结果漏胶了，原来密封垫干硬变形了，泡软后重新安装才恢复正常。这些保养虽然麻烦，但能让仪器用得更久，算下来很划算。

做实验久了就发现，DYCZ-25D型双垂直电泳仪就像需要细心照顾的伙伴，你对它上心，它就给你漂亮的条带。这些技巧都是从一次次失败中总结的，希望能帮你少踩坑，让实验顺顺利利的！

本文由北京六一生物编辑整理。

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