DYCZ-25D型双垂直电泳仪实验方法：从准备到结果的全流程实战指南

作者：六一生物发布时间：2025-07-22 09:34:51 点击：

用DYCZ-25D跑胶两年多，从一开始对着说明书手足无措，到现在能带着师妹稳稳出结果，攒了一肚子实操干货。这台仪器看着简单，实则每个步骤都藏着"坑"，今天就把DYCZ-25D型双垂直电泳仪最实用的操作技巧分享出来，全是带新人时总结的血泪经验。

一、实验前的准备工作

做电泳前必须列清单！玻璃板、密封垫、样品梳、缓冲液、配胶试剂缺一不可。我把清单贴在实验台旁，师妹刚开始总忘带样品梳，现在照着清单捡东西再也没出过错。

新玻璃板一定要用75%酒精擦三遍，出厂带的保护油不擦掉，胶会粘在板上揭不下来。有次图省事没擦干净，染完色的胶怎么都揭不下来，最后只能连板一起拍照，特别影响分析。

缓冲液必须当天配！Tris、甘氨酸、SDS按比例加，pH值必须调到8.3，差0.1都不行。上次大师兄急着赶实验没调pH，跑出来的条带歪得像蛇形，重做时调准pH立马就好了。冬天用缓冲液前一定要回温，直接用4℃的缓冲液跑胶，时间得多花20分钟，亲测有效。

配胶试剂得提前"体检"：APS放4℃冰箱，开封超一个月就扔，我用过期APS配过胶，跑一半居然散架了；TEMED要避光存，加的时候用100μl移液枪滴，新手千万别手抖，一滴能让胶快凝5分钟。

二、凝胶制备的关键步骤

灌胶前组装玻璃板是第一道坎。把密封垫套在大玻璃板上，小玻璃板对齐后轻轻推到底，必须听到"咔嗒"声才算卡紧。师妹第一次没卡到位就灌胶，分离胶漏了一槽，清理半天还得重做，现在她每次都要晃两下确认没松动。

分离胶浓度按分子量选：<30kDa用12%，30-100kDa用10%，>100kDa用8%。加完试剂别使劲摇，顺时针转两圈就行，气泡多了静置两分钟，小气泡会自己浮上来。有次摇太猛产生大量气泡，跑出来的条带全是黑洞。

灌胶速度是关键！拿10ml移液管沿玻璃板内壁慢慢加，每分钟3ml最合适，快了胶会分层。加到距顶端1.5cm停，立刻用异丙醇液封，液面5mm就行，太高容易混进胶里形成杂质带。我试过用水和甘油液封，还是异丙醇效果最好，胶面特别平整。

等分离胶凝固30分钟（夏天快冬天慢），倒掉异丙醇用滤纸轻吸，千万别擦太狠，会把胶面擦毛。浓缩胶固定5%浓度，灌到距顶端5mm处插样品梳，新手可以在梳齿上抹点甘油，不然凝固后拔梳会带起胶块。插梳时要轻，有气泡就拔出来重新插，气泡孔跑出来的条带会变形。

三、样品处理与上样技巧

样品处理不能偷懒：加loading buffer后95℃煮沸5分钟，立刻冰浴冷却，12000rpm离心30秒。上次处理核蛋白没煮够时间，条带拖得像彗星，延长到7分钟就好了。蛋白质少的样品可以煮久点，不用担心变性过度。

上样前装胶板有讲究：大玻璃板朝外对准卡槽，轻轻按下后螺丝拧到中等力度，太紧会夹裂玻璃板。上槽加300ml缓冲液必须没过样品孔，下槽450ml要淹过电极丝2mm，液面不够会导致电流不稳。有次下槽液加少了，条带跑一半就歪了，补加缓冲液也救不回来。

上样是技术活！用10μl细长枪头伸进样品孔1mm处慢慢推，速度快了样品会扩散。1.0mm厚的胶用25齿梳，每孔最多加20μl，加太满会溢到相邻孔，上次两个样品孔串了，白跑一整晚。

Marker必须加在最左孔，我只用预染Marker，跑的时候能直观看到进度。加完样要检查：有气泡用针尖挑破，样品没沉底就用枪头轻推，这些小细节直接决定条带颜值。

四、电泳操作与参数设置

接电源时千万别接反！红对红、黑对黑，接反了样品会往反方向跑，我见过有人跑半小时 Marker没动，才发现正负极接反了，心疼那几块胶。

DYCZ-25D配DYY-6C型电源超稳：初始80V让样品进分离胶，溴酚蓝过浓缩胶界面后调120V，这样条带又直又清晰。夏天室温超28℃时，槽边必须放冰袋，没降温跑出来的条带会糊成一团，别问我怎么知道的。

判断结束看溴酚蓝，跑到距胶底1cm就断电，小分子蛋白可以提前5分钟，大分子得多跑会儿。断电后先拔电源再取胶板，新手最好戴手套，缓冲液里的SDS沾手上会脱皮，亲测刺激。

五、凝胶拆卸与后续处理

拆胶必须用专用塑料铲！从顶端轻轻插进缝隙，听到"啵"的一声就说明胶脱离了，千万别用金属刀片，我见过有人用手术刀撬，直接划废一块玻璃板。

胶粘在板上别硬扯，泡去离子水5分钟自然脱落。分离胶特别脆，拿的时候得托着底部，别捏边缘，上次好不容易跑好的胶被我捏裂了，气得差点砸枪头。

染色转印要及时，胶泡缓冲液超半小时条带会扩散。考马斯亮蓝染色必须摇床慢摇，过夜染色比2小时快速染色背景干净多了，脱色时换两次液，条带会越来越清晰，像洗照片一样神奇。

六、仪器维护的实用技巧

实验结束立刻洗仪器！电泳槽用去离子水冲三遍，电极丝上的结晶用软布蘸稀盐酸擦，不然盐分结晶会腐蚀电极。有次偷懒没洗，下次用的时候电流忽高忽低，折腾半天才发现是电极氧化了。

玻璃板洗完要竖直放架子上，别叠着压，不然会变形。样品梳用软毛刷清理齿间残胶，千万别用铁丝捅，会把梳齿弄弯，我师妹捅弯过两把梳子，现在看见铁丝就躲。

密封垫每月用75%酒精泡一次，保持弹性，老化开裂就赶紧换，几块钱的配件能避免漏胶惨案。上次放暑假前没处理，秋天回来发现密封垫硬得像塑料，只能重新买新的，教训惨痛。

用DYCZ-25D型双垂直电泳仪两年，最大感悟是：实验成败藏在细节里。从一开始的频繁翻车，到现在稳定跑出漂亮条带，靠的就是把这些小技巧刻在脑子里。希望这些经验能帮你少走弯路，毕竟谁也不想熬夜做的实验，因为操作问题白费功夫呀！

本文由北京六一生物编辑整理。

北京六一生物科技有限公司创建于1970年，50多年的历史，公司先后3次承担电泳装置产品国家、行业标准的起草、修订工作，2009年负责《基础电泳装置》国家标准已发布实施。专业生产生物化学与分子生物学检验分析仪器的科技型国有企业。

主要生产包含电泳仪、紫外分析仪、凝胶成像分析系统、酶标仪、化学发光成像系统、基因扩增仪等检验分析设备。

如果您对我们的产品有任何问题，欢迎您的来电：400 960 6117

我们的目标是：做生物化学分析仪器行业海尔

标签：