蛋白质电泳实验中，那些容易被忽略却至关重要的细节

作者：六一生物发布时间：2025-08-26 09:19:38 点击：

做蛋白电泳五年多了，现在回头看自己最早跑的胶，简直惨不忍睹——条带歪歪扭扭，有的像毛毛虫，有的又模糊不清。还记得第一次独立跑胶时，我信心满满地按照protocol操作，结果却跑出了一副"抽象画"，被师兄笑称"现代派科学家"。

这些年，我踩过无数坑，浪费过珍贵的样品，也经历过无数个在暗房里对着失败结果叹气的夜晚。慢慢地，我摸清了这个看似简单实验中的门道，特别是那些容易被忽略，却直接影响结果的细节。

一、配胶时最容易省事的那一步，却是最关键的一步

刚开始那会，我总是急着想要快点看到结果。配胶时，看着表面好像凝固了，就急着拔梳子开始上样。结果可想而知——样品到处乱流，条带歪七扭八。

后来我才明白，配胶最需要的是耐心。特别是分离胶，表面那层凝固了，里面可能还是液态。我现在都会乖乖等上45分钟以上，有时候甚至去做点别的实验再回来。倒掉液封后，我还会轻轻碰一下胶面，看看回弹情况，确认完全凝固了才进行下一步。

拔梳子也是个技术活。以前我总是直接在实验台上拔，经常把上样孔扯坏。现在学乖了，先把整个玻璃板放到电泳槽里，加入电泳缓冲液后再拔梳子，这样孔洞整齐多了。

二、煮样品时的小细节，直接影响条带质量

煮样品这个步骤，我曾经觉得再简单不过——往金属浴里一放，设好5分钟不就完了？直到有次连续几次实验，条带都又宽又散，怎么都找不到原因。最后还是师兄提醒，让我用温度计测一下金属浴的实际温度。结果让人哭笑不得——显示95℃，实际只有85℃左右。

从此以后，我养成了定期校验仪器温度的习惯。煮样品时也会特别注意时间，一定要保证至少5分钟，有时候遇到难变性的蛋白，还会煮到10分钟。煮完后不能立即上样，要稍微冷却一下，但又不能放太久，这个度需要自己慢慢摸索。

三、别为了省那点缓冲液，毁了整个实验

说实话，我刚进实验室时，看到师兄师姐们重复使用电泳缓冲液，也觉得这是理所当然的省钱妙招。直到有一次，我跑的电泳条带全都歪歪扭扭，像在哭又像在笑。导师来看了一眼，直接问："缓冲液用了第几次了？"

原来，缓冲液用多了之后，离子强度和pH值都会变化，特别是SDS会形成沉淀析出。现在我都乖乖每次用新的缓冲液，如果非要重复使用，也绝对不会超过一次，而且只用于考马斯亮蓝染色这种要求不高的实验。

四、上样不是越多越好

新手最容易犯的错误就是拼命加样，总觉得越多越容易出结果。我也这么干过，结果就是条带过宽、相邻条带重叠，整个泳道"炸开"，什么都分不清。

后来我学乖了，做了个梯度上样实验，从5μg到30μg，每个浓度都试了一下，找到了最适合我们实验室条件的最佳上样量。现在每次上样前，我都会仔细计算蛋白浓度，确保每个孔的上样量一致，这样才能比较不同样品之间的表达差异。

五、电泳过程中要留心观察

最开始做电泳时，我总是一设好参数就离开去做别的事。直到有一次听到电泳槽发出"滋滋"声，回来一看，缓冲液漏了，正负极短路，整个实验室都跳闸了。

从此以后，我电泳时再也不离开了。我会仔细观察气泡是不是均匀地从电极冒出，缓冲液液面有没有下降，有没有异常声音。而且我现在都先用80V低电压跑浓缩胶，等条带进入分离胶后，再调到120V-140V。这样跑出来的条带又齐又平，分辨率高多了。

六、最后想说

蛋白电泳真的是一门需要耐心和细心的手艺活。protocol只能告诉你大概的步骤，但真正的诀窍都藏在那些容易忽略的细节里。每次失败，其实都是在教你如何更好地完成实验。

希望我的这些经验教训能帮到刚入门的你，少走些弯路，多跑出几条漂亮清晰的条带。祝大家实验顺利！

本文由北京六一生物编辑整理。

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