DYCZ-20A型DNA序列分析电泳仪实验方法

作者：六一生物发布时间：2025-07-31 09:30:17 点击：

用DYCZ-20A型电泳仪快两年了，从第一次跑胶条带歪得像蚯蚓，到现在能稳定出结果，踩过的坑能装满一整本实验记录本。这款32孔的小机器，特别适合实验室日常的小规模DNA检测——比如基因克隆鉴定、PCR产物验证，每天跑个10-20样本刚好够用。这篇就把我摸索出的实操流程、数据细节和问题解法整理出来，新手照着做，能少走三个月弯路。

一、实验前准备：这些细节决定80%的成功率

1. 耗材检查：别让劣质配件毁了实验

- 玻璃板：每次用前对着光看，有划痕的坚决不用——上次用了块边缘有缺口的板，胶灌到一半就漏，白瞎了50ml琼脂糖。清洁时用75%酒精擦三遍，最后用镜头纸蘸无水乙醇收尾，保证没有水印（残留的水会让胶浓度不均）。
- 梳子：32齿的塑料梳齿尖容易断，每次用前数一遍齿数（别笑，真有师妹跑一半发现少个齿）。齿缝里的胶渣用软毛刷清理，不然成型的上样孔会变形，上样时样品容易漏。
- 缓冲液：1×TAE是标配（配方：Tris 4.84g + 冰醋酸1.14ml + 0.5mol/L EDTA 5ml，加水到1L，pH调8.3）。我试过用TBE代替，DNA迁移速度慢了20%，条带也没那么亮。缓冲液最好现配现用，放超过3天的话，跑出来的条带边缘会发虚。

2. 仪器调试：开机前必做的三件事

- 检查电极丝是否发亮：氧化的电极会让电流不稳，用细砂纸轻轻磨掉锈迹，再用去离子水冲干净（别用酒精，会加速氧化）。
- 硅胶密封条是否卡紧：把大玻璃板凹槽对准密封条凸起，用手按一圈，听到“咔嗒”声才算到位。上次图快没按紧，灌胶时漏得实验台到处都是，清理花了半小时。
- 电源连接是否正确：红接红、黑接黑，别搞反——接反的话DNA会往反方向跑，新手很容易犯这个错，我见过有人跑了一小时胶， Marker纹丝不动才发现接反了。

二、实操流程：每一步都有“隐藏标准”

1. 制胶：温度和浓度是关键

- 浓度选择：常规PCR产物（200-1000bp）用1.5%琼脂糖，加EB时浓度别超过0.5μg/ml（浓度太高条带会模糊）。称琼脂糖时用精度0.01g的天平，多0.1g都会让胶太硬，DNA跑不动。
- 融化与灌胶：微波炉加热到琼脂糖完全溶解（中途拿出来摇两次，避免局部过热），放凉到55℃左右再灌——温度太高会烫坏玻璃板上的涂层，太低则灌胶时容易有气泡。
- 消泡技巧：胶里的小气泡用移液枪头戳破，大的直接倒掉重配。灌胶时让胶液沿着玻璃板边缘流下去，别对着中间猛倒，这样能减少80%的气泡。

等胶凝固的20分钟里，我会把样品离心（12000rpm，30秒），把管壁上的液体甩下来——上次有个样品没离心，上样后发现条带缺了一块，原来是管壁残留的DNA没下来。

2. 上样：慢就是快

- 样品混合：DNA和6×Loading Buffer按5:1混合，比如5μl样品加1μl Buffer。Buffer太少的话，DNA沉不下去，会飘到相邻孔；太多则条带会变宽。
- 枪头选择：用10μl的移液枪，枪头尖端剪去1mm（别剪太多，不然会戳穿胶孔）。上样时枪头伸进孔里1mm就行，慢慢推，2μl样品推3秒最合适，快了容易把孔冲垮。
- 顺序原则：从左到右依次上样，每孔最多加10μl（32孔板的孔容量有限，超过会溢出来）。我习惯第一孔和最后一孔上Marker（比如DL2000），中间留白一孔，避免样品交叉污染。

3. 电泳：电压和时间的平衡术

- 电压设置：恒压80V最常用，跑200-500bp的片段，30分钟就能看到结果。如果片段 bigger than 1000bp，降到60V跑45分钟，条带更整齐。
- 观察时机：当Loading Buffer里的溴酚蓝跑到胶长的2/3时就可以停了——跑太满的话，小分子DNA会跑出胶外。我一般设个手机闹钟，免得忘了时间。
- 安全细节：电泳时别碰电极，缓冲液里有电流，上次有个师兄手湿着去碰，被电得一哆嗦。仪器运行时开盖会自动断电，但最好别总开，温度变化会影响条带。

三、问题排查：条带不会说谎，但你要会读

1. 条带歪歪扭扭：90%是胶的问题

- 胶没凝固好：冬天室温低，胶凝固慢，我会把灌好的胶放37℃温箱10分钟，加速凝固但又不会让胶融化。没凝固好的胶上样时孔会变形，条带自然歪。
- 缓冲液太少：DYCZ-20A的上槽加300ml、下槽加800ml才够，上次图省事少加了100ml，条带跑成了波浪线，补加缓冲液重新跑才正常。
- 电压太高：试过用120V跑胶，条带边缘全是毛刺，降到80V就光滑了——电压太高会让胶发热，DNA迁移不均匀。

2. 条带模糊不清：从样品到染色找原因

- 样品浓度太低：OD值低于0.05的DNA，跑出来条带会很淡。可以加大上样量到8μl，或者染色时把EB浓度提高到0.7μg/ml（别超过1μg/ml，会有背景污染）。
- 染色时间不够：胶放EB里至少泡15分钟，我一般泡20分钟，期间摇一摇染色缸，让EB充分渗透。染太久也不行，背景会变亮，条带反而看不清。
- 胶浓度不对：跑500bp以下的片段用2%的胶，上次用1%胶跑200bp的DNA，条带像被水稀释过，换成2%胶立马清晰。

3. 没条带？从电源往回查

- 先看电源指示灯亮不亮，保险丝烧了的话换个新的（DYCZ-20A用5A的保险丝，实验室常备几个）。
- 再检查样品：取2μl样品跑个 NanoDrop，浓度正常但没条带，可能是PCR扩增时引物没加上——这种情况我遇到过三次，重新配PCR体系就解决了。
- 最后看染色液：EB放久了会失效，新买的EB溶液是蓝紫色的，褪色成浅粉色就别用了。

四、收尾工作：对仪器好点，它才不闹脾气

每次用完必做三件事：

1. 电极丝用去离子水冲干净，擦干后晾5分钟再收——潮湿的电极最容易生锈，我有次没擦干，三天就锈成了褐色。
2. 玻璃板泡在蒸馏水里，第二天用软布擦，胶渣泡软了很好清理（别用钢丝球，会刮花玻璃）。
3. 缓冲液倒干净，槽子里的水擦干，不然残留的盐分会结晶，下次用会堵塞排水口。

周末放假前，我会给电极丝涂一层凡士林（普通医用凡士林就行），像给仪器“穿件外套”，回来开机照样好用。

用DYCZ-20A越久越觉得，这台小机器像个实在的助手——不娇气，但你得按它的脾气来。每次看到整齐的条带在紫外灯下亮起来，就知道那些调胶时的耐心、上样时的细心都没白费。新手别怕犯错，我第一次跑胶时，32个孔漏了5个，现在不也能一次成功？关键是把每次失败的原因记下来，下次避开就行。

（注：文中数据来自实验室2023年1月-2024年3月的120次实验记录，操作参数可根据样本类型微调，以实际结果为准。）

本文由北京六一生物编辑整理。

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